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质粒载体和外源DNA中限制酶切位点的性质

发表时间:2019-07-17 14:28作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

质粒载体和外源DNA中限制酶切位点的性质

如今,质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多,因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源DNA片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可比拟的优点,也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源DNA。另一种方案,则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如,识别不同的六核苷酸的限制酶BamHl和BglⅡ产生具有相同突出末端的限制酶切片段,这样用BglⅡ消化而制备的外源DNA片段可以克隆到用BanHl消化的质粒中。这通常会使接合序列不能被曾用于外源DNA或制备载体的任何一种酶所切开。然而很多清况下,用切点位于多克隆序列侧翼的限制酶进行消化,可将片段从重组质粒中摘出。偶尔在质粒的以及外源DNA两端的限制酶切位点之间,不可能找到“门当户对”的搭配关系。这时可用下面两种方案加以解决:

1)在线状质粒末端和(或)外源DNA片段的末端接上合成在接头或衔接头。

2)在得到控制的反应条件下,用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段部分补平带3'凹端的DNA片段。如第九章所讨论,这样常可以使那些不相匹配的限制酶切位点转变为互补末端,从而促进载体和外源DNA的连接。因为部分补平反应消除了同一分子两端彼此配对的能力,故连接反应过程中环化和自身寡聚化的机会也会有所降低(Hung和Wensink,1984;Zabarovsky和Allikmets,1986)。


文章分类: 分子技术资料
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