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辛酸提取法纯化多克隆抗体

发表时间:2019-07-18 15:46作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

辛酸提取法纯化多克隆抗体

该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。

  【材料和试剂】

  (1)正辛酸。

  (2)60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS。

  (3)透析袋。

  (4)高速低温离心机。

  【操作步骤】

  (1)将待提取样品用60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液稀释3~4倍,调pH至4.5,对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。

  (2)在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸,按每ml样品中加25μl,若样品体积小于5ml,则每ml样品内加入30μl正辛酸,搅拌30min。

  (3)10 000×g离心30min,取上清液通过定性滤纸过滤,装人透析袋,用20倍体积的PBS,4℃透析过液,中间换液3~4次。

  (4)然后每毫升混合液加0.27g硫酸铵,搅拌30min。

  (5)以5000g离心15min,收集沉淀物,溶于少量PBS中,再以15000×g离心20min。上清液即为提取的Ig,其中大部分为IgG,约占90%,少量为IgA及IgM,回收率>80%。整个操作可在24h内完成。


文章分类: 抗体技术资料
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