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揭示中性粒细胞在异基因造血干细胞移植中的多方面作用

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发表时间：2020-11-18 10:22作者：武汉新启迪Xinqidibio

摘要

异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)是一种用于治疗某些恶性血液病、先天代谢错误和骨髓衰竭的挽救生命的方法。中性粒细胞在异基因HSCT中的作用，传统上只从其作为抵抗感染的第一道防线的能力来评价。然而，最近的证据强调中性粒细胞是先天和适应性免疫反应的关键效应，通过一系列新发现的功能。因此，中性粒细胞是一种高度多才多艺的细胞，它们能够根据微环境及其分化状态获得不同的、往往相反的功能能力。本文就中性粒细胞在异基因造血干细胞移植的不同阶段表现出的多种功能，从供体的造血干细胞(HSC)动员到HSC输注后受体的免疫重建等方面进行综述。我们还讨论了免疫抑制药物作为移植物抗宿主病(GVHD)预防的一部分在同种HSCT过程中对中性粒细胞的影响。最后，还讨论了中性粒细胞在移植物相关血栓性微血管病(TA-TMA)、急慢性GVHD和巨细胞病毒(CMV)再激活等相关并发症中的潜在作用。根据本文回顾的数据，中性粒细胞在同种异体HSCT中所起的作用远大于简单的抗菌作用。然而，在诸如alloHSCT这样的高度复杂的过程中，中性粒细胞可能发挥的潜在功能还有待进一步研究。

导言

异基因造血干细胞移植(Allohsct)已成为血液系统恶性肿瘤、先天代谢错误或骨髓衰竭综合征患者的一种公认的挽救生命的方法。1简单地说，同种异体造血干细胞(AlloHSCT)包括从人类白细胞抗原(HLA)--相同的兄弟姐妹、与HLA相匹配的无关供者，或者甚至是另一种供者[半相合、不相关、脐带血(CB)]--转移到接受过预处理方案的患者身上的造血干细胞(HSC)。2HSCs输注后是植入前阶段，其特点是全血细胞减少，持续10~20天，视HSC来源、供体类型、调理方案、最终的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、移植物抗宿主病(GVHD)预防方案或并发感染/非传染性并发症而定。3,4移植物是同种异体造血干细胞移植的关键阶段，传统上被定义为连续三天中的第一天，在此期间，患者的中性粒细胞绝对计数超过0.5×10。9/l，并伴有持续血小板(>20×10)9/l)和血红蛋白水平(>80克/升)，不需要输血。4植入后，供体来源的免疫系统经历了一个重建阶段，包括在最初几周依赖于恢复先天免疫细胞的能力的逐步获得，以及在随后的几个月中适应性免疫细胞的逐渐获得。3,5,6,7因此，中性粒细胞是最先重建的细胞之一，在同种异体造血干细胞移植后的最初几周，几乎所有的外周血细胞都是由中性粒细胞构成的。3在此期间，其他细胞包括单核细胞、自然杀伤细胞(NK)、树突状细胞(树突状细胞)和残余T细胞，这些细胞被注入移植产物并进行外周扩张。3,7。在血液病患者中，同种HSCT的疗效也依赖于肿瘤的根除，这既取决于预处理方案，也主要取决于由供体来源的T细胞介导的移植物抗肿瘤(GVT)效应。2,8,9值得注意的是，同种异体HSCT具有多种变量的特点，包括：(1)预处理方案的强度(即清髓强度与减弱强度与非清髓强度)；(2)HSC来源[即BM与动员外周血与CB]；(3)免疫抑制方案类型[即环孢素A(CsA)或他克莫司他克莫司(他克莫司)有较短的甲氨蝶呤、CSA和霉酚酸酯，最终抗胸腺细胞球蛋白(ATG)和环磷酰胺后)。10

中性粒细胞不再被视为只参与对感染的初级防御。11最近发现的他们的多方面的活动(主要显示在图。1)事实上，它们不仅在先天和适应性免疫反应中起着关键作用，而且在许多意想不到的生理病理过程中发挥着重要作用，如血管生成，12免疫介导的疾病，13还有癌症。14此外，最近已经证明，在所发挥的多种功能中，中性粒细胞也能够与其他白细胞进行串扰，15移入淋巴结(LNS)16甚至发挥抗原提呈细胞的作用。17中性粒细胞也是一种高度多才多艺的细胞，根据生理或病理背景及其分化/激活状态，能够获得不同的、往往相反的功能能力。18因此，具有不同功能的成熟或不成熟中性粒细胞的不同异质群体最近已经被确定、表征和命名，尽管对于它们是否明确地代表明确的群体还没有普遍的共识。18,19,20图形2根据中性粒细胞的功能和本征密度，对目前有关中性粒细胞异质性的知识进行图式化。事实上，除了表型外，最常用来区分中性粒细胞的标准之一，是界定他们发挥免疫抑制作用的能力(即抑制增殖，或由活化的T细胞产生干扰素-γ)。21或发挥增强的促炎功能[即增加产生促炎细胞因子和/或释放中性粒细胞外陷阱(Nets)的能力]。22细胞密度特性是通过在商业梯度(例如Ficoll)上离心血液或其他生物样本来揭示的。因此，来自健康供体(HDs)的成熟中性粒细胞(HDs)通常被称为“正常密度中性粒细胞”(NDNS)，并将沉淀成白细胞层的细胞代表在红细胞上(如图所示)。2)。患者的NDNS可能在体内被激活，进而获得免疫调节功能，这种功能可能是免疫抑制的。23,24,25或促炎/免疫激活，26取决于疾病。22,27,28患者循环中性粒细胞的密度可能低于NDNS，这可能是由于其不成熟或体内激活等因素所致，密度梯度离心后可能导致其在外周血单个核细胞(PBMCs)内定位。因此，这些中性粒细胞被命名为低密度中性粒细胞(LDN)。2)，通常由成熟和不成熟的中性粒细胞组成。18,29,30LDN也可能表现出不同的免疫调节特性，这取决于疾病或其他环境。例如，低密度粒细胞(LDGS)在自身免疫性疾病患者中具有高度的促炎作用(图1)。2).22相比之下，癌症患者29,31,32,33,34,35,36或者感染，25,37在怀孕期间，38,39在HDs中使用G-CSF30,40,41,42或在alloHSCT中(如下所述)，43,44LDN具有免疫抑制作用，通常称为多形核髓源性抑制细胞(PMN-MDSCs)或粒细胞型MDSCs(G-MDSCs)。

通过积累证据证明中性粒细胞的可塑性及其影响适应性免疫的能力，11,18令人惊讶的是，中性粒细胞在异基因HSCT中大部分被忽视了。本文就人类中性粒细胞在异基因造血干细胞(AlloHSCT)、供者(外周血造血干细胞(PBSC)动员过程中)和受体(在异基因HSCT的不同阶段)中的特征、功能和作用进行综述。中性粒细胞在同种异体HSCT相关并发症中的作用也将进行综述。有关中性粒细胞和支持和/或复制同种HSCT相关临床或病理条件的小鼠模型的研究也将被提及。虽然同种异体HSCT中中性粒细胞的特征和功能问题是值得关注的问题，但也应考虑到一些注意事项和问题。例如，在体内实验方面，应注意的是，临床前模型总是部分代表同种异体HSCT程序的复杂性，特别是在调理、免疫抑制预防治疗和同时用药方面。45另一方面，根据文献，从人外周血或小鼠骨髓中分离出的中性粒细胞并不总是得到很高水平的纯化(<97%)；因此，它们经常受到单个核细胞的污染，这可能会产生混乱的结果，特别是在基因表达和细胞因子释放方面。46同样，中性粒细胞必须在不含脂多糖(LPS)的培养基和试剂中进行仔细和快速的处理，以避免非特异性活化细胞在体外实验中产生的结果。最后，关于体内外的研究，值得注意的是，同种异体HSCT患者群体通常不是非常同质的，因为它们在条件的强度、HSC来源、供体类型、伴随的共患病，特别是免疫抑制治疗方面可能有所不同。因此，在包括异质患者群体在内的体内外研究中观察到的结果的可靠概括在某些方面是值得怀疑的。鉴于这些限制，读者会注意到，与其他临床背景不同的是，关于异体HSCT的文献只部分涵盖了中性粒细胞的生物学，并留下了许多相关的问题没有答案。无论如何，这里修订的信息使我们可以得出结论，在同种异体HSCT中，中性粒细胞的功能远远超过单纯参与抗菌活动的吞噬细胞。

G-CSF诱导PBSC动员过程中中性粒细胞的功能及异质性

PBSCs目前是成人同种异体HSCT最常用的HSC来源。47这些细胞是从先前使用重组G-CSF 4~5天(以下简称GDS)的HDs外周血中提取的。48“动员”一词指的是指将G-CSF诱导的HSCs从骨髓中强制侵入外周血的过程，即PBSCs在收获前通过分离到移植物制品而进入外周血的过程。48显然，即使是为了HSC动员的目的，G-CSF也必然影响中性粒细胞及其前体的激活状态和功能。如下所述，GD中性粒细胞的研究主要集中在以下两个方面：(1)骨髓中性粒细胞在G-CSF给药过程中作为PBSC动员介质的作用；(2)G-CSF动员治疗结束时外周血中性粒细胞的异质性和功能；

骨髓中性粒细胞在G-CSF作用下PBSC动员中的作用

正如Tay等人广泛评论的那样。49关于中性粒细胞参与G-CSF诱导的PBSC动员的文献中存在相互矛盾的数据.事实上，G-csf并不直接作用于hSCs(除了诱导它们在bm中扩张外)，尽管它们的自我更新能力降低了。50在压力下生存51)而是通过其他表达G-CSF受体的BM-驻留细胞间接发挥作用。52,53因此，根据对HDs和小鼠模型PBSC动员的研究，中性粒细胞最初被认为是G-CSF的造血中间体。在此背景下，我们发现中性粒细胞衍生的丝氨酸蛋白酶可以切割和灭活粘附分子和趋化因子[血管细胞粘附分子-1(vcm-1)]。52,54C-X-C基序化学因子配体12(CXCL 12)55]在稳定状态下，将HSCs保留在BM生态位中(如图所示)。3，机制1)。从G-CSF动员的小鼠骨髓标本的特点是成熟的中性粒细胞及其前体的急剧增加。54IHC分析显示VCAM-1在间质细胞中的表达缺失。52,54在体外，同一小鼠的胞外BM液与人外周血中性粒细胞培养上清的VCAM-1类似，进一步表明中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和组织蛋白酶G(CG)是参与G-CSF诱导的HSC动员的主要丝氨酸蛋白酶。52,54与上述结果一致，G-CSF动员患者血清可溶性VCAM-1和NE水平升高.52G-CSF诱导的hsc动员也与中性粒细胞介导的CXCR 4的N端断裂(即CXCL 12的受体)有关，无论是在BM中还是在外周血中。55(无花果)3，机制2)。报道动员的HDs和小鼠骨髓中CXCL 12的浓度随中性粒细胞来源丝氨酸蛋白酶的积累而降低。55,56后一种酶也被报道在小鼠肝干细胞中切割酪氨酸激酶C-试剂盒，即干细胞因子(Scf)受体。57(无花果)3，机制2)。此外，应用G-CSF后，小鼠中性粒细胞在骨髓中膨胀，通过产生活性氧(ROS)诱导间充质干细胞(MSCs)和成骨细胞凋亡。58(无花果)3、机制3)。因此，CXCL 12、SCF和VCAM-1在骨髓骨内膜小生境中的表达都是HSC所必需的。58总之，上述研究指出，G-CSF刺激的中性粒细胞(及其前体)通过释放丝氨酸蛋白酶或ROS，在支持HSCs从BM小生境中流出的过程中起着至关重要的作用。然而，中性粒细胞在G-CSF诱导的PBSC动员中的中心作用受到其他研究的质疑。事实上，部分缺乏NE，CG或二肽酰肽酶-I表达的小鼠被证明在G-CSF作用下动员HSCs的程度与野生型小鼠相同。59最近的证据似乎抑制了中性粒细胞在HSC动员中的作用，进而表明它们的蛋白酶释放只是G-CSF诱导的骨小生境关闭后的多个事件之一。60虽然G-CSF目前代表了HDs中PBSC动员的标准方案，61目前正在进行研究，以确定替代的动员剂。例如，AMD 3100/plerixafor(通过抑制HSCs表达的CXCR 4)虽然仍在研究中，但单独使用62,63或者联合G-CSF，64代表一种有效的，直接的HSC动员剂，不需要中性粒细胞的参与。此外，根据人类和小鼠模型的数据，plerixafor控制中性粒细胞的贩运，方法是诱导中性粒细胞从肺中脱泥，并阻止其归巢至bm。65或者，或者，通过偏袒他们从BM的出口。66最后，在小鼠模型的前临床水平上探索了针对极晚期抗原-4(VLA 4)的联合动员策略。VLA 4是一种有助于HSCs在BM生态位中保留的粘附分子，或CXCR 2(由基质细胞和中性粒细胞表达)。67在这种情况下，中性粒细胞已经被假设促进VLA 4激动剂通过释放蛋白酶来动员HSC。67此外，在CXCR 2激动剂的刺激下，中性粒细胞也可以通过与内皮细胞的相互作用，促进HSCs从BM生态位的分泌。67

G-CSF动员治疗结束时外周血中性粒细胞的异质性及功能

体外研究分析外周血中性粒细胞的表型和功能后，G-CSF用于动员的目的是相对较少的。这不仅是由于研究人员和临床医生对接受移植的hSCs的产量和质量普遍感兴趣，而且也是由于长期认为中性粒细胞是短命细胞，只是移植产物的污染物。尽管如此，在G-CSF诱导的PBSC动员后，外周人或小鼠中性粒细胞所获得的免疫调节特性最近已经出现了重要的数据。事实上，来自gds的中性粒细胞与hds有许多不同的特征，而不是表现为不成熟和成熟活化细胞的异类群体，具有鲜明的特征。68(无花果)4).

研究表明，LDNS/PMN-MDSCs在体内与T细胞受体ζ链表达降低有关，体外与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、佛波醇-肉豆蔻酸酯(PMA)和离体霉素刺激的T细胞分泌减少有关。28有趣的是，Vascontelos等人也描述了具有类似性质的中性粒细胞。40在GDS的外周血中。4)。因此，与骨髓和HDs外周血相比，干扰素-γ和IL-4在PMA或离子霉素处理4h后产生的T细胞功能明显降低。40此外，详细的形态学分析表明，分离产物的单个核部分主要由中性粒细胞(即LDNS/PMN-MDSCs)组成，其在体外培养48h后死亡，同时T细胞产生IFN-γ的恢复。40稍后，Luyckx等人。41从GDS采集的未分馏外周血中鉴定(见图)。4)成熟的SSC种群嗨CD 33INTCD 14低层CD 15+中性粒细胞能在体外负调控T细胞的异种反应性。Marini等人30进一步研究了免疫抑制性中性粒细胞在表型和功能方面的特点，并对GDS和HDs的NDNS和LDN进行了比较。根据CD 10作为成熟中性粒细胞的标记，NDNS和LDNs都含有一个由CD66b组成的异质群体。+CD 10−未成熟中性粒细胞与CD66b+CD 10+成熟中性粒细胞30(无花果)4)。重要的是，CD66b+CD 10−发现LDN具有免疫刺激功能，CD66b。+CD 10+中性粒细胞导致免疫抑制功能30(无花果)4)。此外，CD66b+CD 10+从LDNS、NDNS或GDS全血中分离的中性粒细胞通过CD 18介导的接触依赖性精氨酸酶1(Arg-1)的释放，抑制CD3/CD 28诱导的T细胞增殖和IFN-γ的产生。30如预期，CD66b+CD 10+从HDs的NDNS中分离出的中性粒细胞对任何T细胞功能均无调节作用。30此外，CD66b+CD 10+GDS细胞的CD 16和CD 54/ICAM-1、CD11c和CD 35的表达均高于CD66b，表现为CD 16和CD 54/ICAM-1、CD11c和CD 35的高表达。+CD 10+中性粒细胞来自未经刺激的HDs。30虽然CD 10本身就是一种激活标记，69,70CD 10缺乏T细胞抑制活性+来自HDs的中性粒细胞表明，在体内G-CSF诱导复杂的细胞重新编程，而不是一般的激活状态。有趣的是，在体外实验中，从HDs中提取的NDNS在G-CSF治疗后没有获得任何免疫抑制功能。30综合起来，Marini等人提供的数据。30提示CD 66的免疫抑制性+CD 10+GDS的成熟中性粒细胞严格依赖于体内接触G-CSF，并最终依赖于其他G-CSF诱导因子，如IL-6、IL-10、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子-β(TGF-β)和前列腺素E-E。2(PGE)2)，可诱导PMN-MDSC分化。19然而，根据同一作者，CD 66的免疫抑制特性+CD 10+来自GDS的成熟中性粒细胞不一定与其沉降到梯度的低密度部分有关。30最近，图米诺等人。42已在G-CSF动员的半相合供体的αβ、T细胞和B细胞缺失的分离产物中进行了鉴定。4)高密度的pmn-mdSCs群体(即低密度cd 45)+林−赫拉博士−/LowCD 33+CD11b+CD 14−CD66b+)能够对自体NK细胞对受体白血病细胞的体外杀伤活性产生明显的抑制作用。基于这些发现，作者推测，αβT细胞和B细胞缺失的移植产物中的PMN-MDSCs可能抑制共注入的成熟NK细胞在受体体内的移植物抗白血病活性。42有趣的是，同样的pmn-mdSCs的免疫抑制活性与吲哚胺2，3-双加氧酶(Ido)的产生有关。2，以及外胚层。42

总的来说，虽然分析了不同的样本类型，即分离产品40,42相对于外周血，30,41利用不同的鉴定方法和体外分析，上述所有研究都表明G-CSF在体内诱导具有免疫调节特性的不成熟和成熟中性粒细胞的异种群体的能力(如图1所示)。4)。目前尚不清楚这些细胞在何种程度上与HSCs在切断术过程中相互作用(以及分离器械的设置对这种共混化有多大的影响)、输注后它们的寿命、以及在异基因HSCT后的功能表现、免疫背景的改变和免疫抑制药物的使用。关于第一个问题，Lv等人。71评价应用G-CSF动员前后20例HDs骨髓和外周血的组成(MDSC亚型)，以及相应移植物的组成。据这些提交人说，SSC低层CD11b+CD 33+CD 14+赫拉博士−林−CD 15昏暗CD 16−单核细胞(M)-，SSC高CD 33+CD11b昏暗CD 16−林−早幼粒细胞(P)-和SSC高CD11b+CD 33昏暗CD 15+赫拉博士−林−G-CSF治疗后供者骨髓和外周血中粒细胞(G)-MDSCs明显增多.71然而，移植物中G-和P-MDSCs的含量低于动员后的外周血样本。71与此形成对照的是，M-MDSCs在移植物中富集，表明与P-和G-MDSCs相比，遗传过程能优先保留M-MDSCs。71与这些数据相比，来自半相合供体的αβT细胞和B细胞缺失的分离产物中pmn-mdscs(定义为低密度CD 45)所占的比例要高得多。+林-赫拉博士−/LowCD 33+CD11b+CD 14−CD66b+细胞)比M-MDSCs。42

其他需要澄清的问题是G-CSF动员的移植物产品中是否存在免疫抑制性中性粒细胞，是否会影响同种异体HSCT患者的预后，对急性GVHD(AGVHD)或对GVT产生不必要的抑制作用。对62例接受G-CSF启动骨髓联合G-CSF动员PBSCs半相合HSCT的患者进行评价，Lv等。71多因素分析显示，注射P-MDSCs或M-MDSCs的绝对数与Ⅱ-Ⅳ级aGVHD和广泛性慢性GVHD(CGVHD)的发生呈负相关。

成熟的、低密度的、免疫抑制的中性粒细胞对aGVHD也有保护作用。因此，初步数据显示，用密度梯度离心法获得的G-csf小鼠脾细胞的低密度部分含有大部分成熟的种群(Gr1)。+SCA 1−)中性粒细胞，占整个低密度细胞(即LDN)的20%.72用G-CSF处理小鼠中性粒细胞，也能通过依赖过氧化氢的机制抑制T细胞产生干扰素-γ。72重要的是，在以脾细胞作为异基因T细胞来源的实验aGVHD模型中，Gr1+G-CSF处理小鼠脾细胞中的细胞对aGVHD有保护作用.72事实上，注射耗尽Gr1的脾细胞+细胞与aGVHD的发生有关。72最近，Perobelli等人。73通过证明G-CSF处理的小鼠脾细胞对aGVHD的保护作用依赖于抑制性IL-10的存在，从而扩展了这些结果。+LDN可诱导移植后T调节因子(CD4)的扩增+CD 25+Foxp 3+)细胞(Tregs)73。有趣的是，IL-10+作者将LDN定性为活化的Ly6C。−Ly6G+细胞吞噬能力强，过氧化物产量高，髓过氧化物酶(MPO)活性低，胞浆颗粒含量低，MHCⅡ类和共刺激分子表达低，Arg-1表达低。73因为这些IL-10的特性+Ldn并不完全符合任何已知的人类中性粒细胞的可用描述，作者提到了这些IL-10。+LDN只是激活和抑制的“G-中性粒细胞”。73要详细了解同种异体HSCT中的所有MDSC类型，无论是在人类还是在小鼠中，请读者阅读D‘Aveni等人的文章。74

综上所述，这些发现表明中性粒细胞在G-CSF给HDs动员后获得了复杂的免疫调节作用。然而，迫切需要进一步的研究，以便前瞻性地、在供者和患者的同质人群中，研究移植物制品中是否存在免疫调节的中性粒细胞，它们在PBSC输注后在受体中持续存在的程度，以及它们与aGVHD的发生和GVT效应的关系。

同种异体HSCT受者中性粒细胞免疫表型及免疫重建过程中的特性

如前所述，在异体HSCT的HSC植入阶段之后，供体来源的先天免疫细胞和适应性免疫细胞被重组。中性粒细胞是重建的第一批细胞之一，因此代表了绝大多数循环细胞，几乎是病人在异基因HSCT后的头几周内所依赖的免疫系统中的唯一细胞。3,5然而，对异基因造血干细胞移植后中性粒细胞重建的功能和/或特征的研究却很少。75除了中性粒细胞是不能发挥额外生物功能的简单吞噬细胞这一古老的经典观点外，一些阻碍因素(包括伴随的临床并发症和治疗方面的患者异质性)阻碍了旨在在整个免疫重建过程中确定中性粒细胞表型和特性的研究的实施。因此，传统上，对异基因HSCT受体的外周血中性粒细胞进行常规血细胞计数分析来评估其数量，以评估移植的效果和对感染的天然免疫的挽救。关于它们的免疫表型，文献中很少的数据表明，大多数重组中性粒细胞由终末分化的CD 10组成。+和CD 16+CD11b表达水平与HD中性粒细胞相似。76,77根据中性粒细胞作为异质细胞群体的最新进展，只有少数报告专门讨论了免疫重建问题。18,20在一项研究中，评估26名患者的外周血G-和M-MDSC亚型，在适应前和在6个时间点后的前3个月异体HSCT，管氏等。78确定了CD 33的种群+CD 15+CD66b+GMDSCs在异基因HSCT后+27~29天达到与患者在预适应期相同范围内的绝对值。有趣的是，这些细胞有功能，因为它们被发现可以抑制CD4。+干扰素-γ+Th1细胞及促进CD4的发展+CD 25+Foxp 3+CD3/CD 28刺激的第三方CD4共培养实验中的Treg细胞+T细胞78与这些数据一致的是，预处理时的G-MDSC数和第27-29天的G-MDSC与预处理时的数量成反比，与II-Ⅳ级aGVHD呈负相关。78

在一项初步的前瞻性研究中，我们发现在异基因造血干细胞移植后的+21，+42，+60，+90和+180天，8例HDs和39例患者外周血中LDNs的频率高于HDs，未成熟的CD66b逐渐减少。+CD 10−无GVHD患者LDN的比例。44重要的是，与未成熟的中性粒细胞的T细胞激活表型一致，30CD66b频率+CD 10−受aGVHD影响的患者LDNs明显高于无此并发症的患者。44基于前两项研究，44,78似乎合理的假设，HSC输注后，重组不同群体的中性粒细胞具有免疫调节性质。显然，需要进一步的研究来确定这些中性粒细胞群体是否真正参与GVHD和/或GVT的病理生理过程，并阐明其作为潜在治疗靶点的作用。

有关功能成熟中性粒细胞在免疫重建过程中维持的对比数据已经发表。75事实上，虽然一些作者报道中性粒细胞的功能没有受到影响，但也有一些人说，中性粒细胞功能在异基因造血干细胞移植后的前1-12个月内就减少了，特别是伴随着GVHD或其他同种异体HSCT相关并发症。例如，据报道中性粒细胞趋化性下降。79,80,81或未受影响82相对于来自HDs的细胞。此外，吞噬功能也被描述为要么下降，要么下降。83或者正常。77,81,84,85据报道，一些作者在异基因HSCT后的头几个月出现了对离散性刺激反应的呼吸爆发功能受损。82,85,86但不是别人。77,87最近的研究还指出，异基因HSCT患者的中性粒细胞释放网状网对PMA的反应能力降低。88,89或者LPS。76网状网是由中性粒细胞来源的染色体DNA、组蛋白和颗粒蛋白组成的细胞外网，为局部高浓度的抗菌成分提供了支架，可以体外杀死微生物。90NET的部署与质膜破坏相耦合，最终导致一种称为“NET”的细胞死亡。91与其他中性粒细胞衍生的防御产品一样，网状网对宿主也可能具有高度毒性，其释放可能导致细胞损伤和器官功能障碍。92再一次，上述数据是从不同人群的GVHD预防方案获得的，这可能解释了相互矛盾的结果。

免疫抑制剂对中性粒细胞功能的影响直到最近才被强调。虽然诸如CSA和他克莫司/FK-506(钙调神经磷酸酶抑制剂，CNI)和雷帕霉素[雷帕霉素(MTOR)抑制剂的哺乳动物靶标]等药理学药物已列入aGVHD预防计划，其主要目的是抑制T细胞同种反应性，10越来越多的证据表明，它们干扰了先天免疫细胞的功能。CNI是标准aGVHD预防方案的一部分，它抑制钙调神经磷酸酶介导的活化活化的活化T细胞转录因子(NFAT)，以及许多T细胞衍生细胞因子(包括IL-2)的转录和产生。93体外实验也表明，钙调神经磷酸酶NFAT通路激活和控制了人和小鼠髓系细胞的重要抗病原体功能，CNIS可能会损害这些细胞。94,95根据初步研究，事实上，用CsA处理的小鼠中性粒细胞在体外被发现存在缺陷。白色念珠菌其杀伤活性与携带有条件缺失钙调神经磷酸酶B基因的中性粒细胞相似，提示钙调神经磷酸酶-NFAT信号通路参与抗真菌作用。94值得注意的是，csA介导的真菌杀伤损伤并不与吞噬功能下降、活性氧生成、一氧化氮(NO)或MPO脱颗粒的产生有关，而是与一种尚未确定的杀伤机制有关。94相反，酵母多糖(酵母组分)触发钙调神经磷酸酶/NFAT通路，激活小鼠中性粒细胞中IL-10、COX 2、Egr1和Egr2等NFAT依赖基因。94CsA还可下调小鼠中性粒细胞NFAT依赖的核苷酸结合寡聚区1(Nod 1)基因的转录，该基因编码一种细胞内模式识别受体，参与中性粒细胞对革兰氏阴性细菌的感知和吞噬细胞反应。95随后发现csa和他克莫司类似物ascomycin剂量依赖性地削弱了人中性粒细胞对cxcl 8或ionomycin的体外释放网状结构的能力。96但不是对LPS的反应。97非常重要的是，一项体外研究比较了抗-烟曲霉(AF)异基因HSCT患者(植入后2、6和10个月)和他们各自的HDs的中性粒细胞对房颤菌丝生长的抑制作用持续到CsA或他克莫司停药或大幅度减少为止。87值得注意的是，在显著的治疗性csa或他克莫司血浆水平下，Nets的释放是唯一的抗真菌活性受损。87综上所述，这些数据表明，随着刺激条件的不同，某些中性粒细胞的抗病原体功能在同种异体HSCT患者中可能由于CNIS的治疗浓度而受到损害。

近年来的研究证实了mTOR网络(由mTOR复合物1和2(mTORC 1和mTORC 2)组成)在控制和形成天然免疫细胞效应反应中的重要作用。98特别是mTOR参与了人和小鼠中性粒细胞趋化性迁移的控制、mRNA的组成性翻译和促炎性细胞因子的表达。98虽然与CNI相比，GVHD预防计划不那么常见，99雷帕霉素已被证明能干扰重要的中性粒细胞功能。例如，体外研究表明，在人中性粒细胞中，雷帕霉素抑制肌动蛋白聚合，从而干扰gm-csf诱导的趋化作用，并在较高剂量下干扰cxcl 8的趋化作用。100还有磷脂酸。101此外，雷帕霉素还可通过不同的刺激方式调节人中性粒细胞释放网状网。98因此，雷帕霉素抑制脂多糖对细菌净释放的影响，其机制是通过翻译控制hHIF-1α，这是mTOR途径的下游调节因子，也是抗菌防御的关键调节因子。97相反，雷帕霉素通过正向调节自噬作用，促进中性粒细胞在体外通过细菌源肽甲酰基-蛋氨酸-Leu-Phe(FMLF)促进网状结构的释放。102有趣的是，在一项研究中未观察到净释放，该研究分析了接受CNIS治疗(单独或与其他免疫抑制剂)并暴露于雷帕霉素的同种异体HSCT患者的中性粒细胞。88最后，雷帕霉素还能抑制IL-23诱导的小鼠中性粒细胞产生IL-22和IL-17。103因此，根据这些体外观察，人中性粒细胞在接触CNI或mTOR抑制剂时可能抑制某些抗病原体功能。

其他类型的免疫抑制剂，包括ATG、甲氨蝶呤、霉酚酸酯和后HSCT环磷酰胺(可与CNI或雷帕霉素联合用于aGVHD预防方案)可能损害中性粒细胞功能。此外，治疗公开的aGVHD可能需要使用额外的免疫抑制剂，如类固醇，10因此，在异体HSCT后的头几个月，中性粒细胞功能的评估进一步增加了复杂性。例如，在一项前瞻性研究中，51名患者在HSCT后+30，+90，+180和+360天进行了分析，Stueheler等。86观察到中性粒细胞产生ros的能力趋于减弱。烟曲霉A.在aGVHD患者中，激素治疗组与无aGVHD组比较。尽管缺乏活体研究(除了Imbert等人的研究外)。87)可以想象，异基因HSCT患者的中性粒细胞会因病原体和/或免疫抑制剂类型和血浆水平而缺乏某些抗病原体功能。

在评估免疫重建过程中中性粒细胞能力时，另一个复杂因素是G-CSF，它与某些同种异体HSCT患者(如接受CB的患者)的免疫抑制剂同时使用。104或者半相合的HSCs。105基于ATG治疗延迟CD4的证据+接受CB+G-CSF的患者T细胞重建比仅接受BM的患者更为严重。104推测G-CSF可能增加了ATG介导的中性粒细胞对T细胞的吞噬活性。根据这一假设，GDS的中性粒细胞在体外吞噬ATG靶向T细胞的能力明显高于HDs的中性粒细胞，104因此，在体内，G-CSF激活的中性粒细胞可能是CB注射后所观察到的延迟性T细胞重建的原因之一。

鉴于上述发现，研究人员在分析人类同种异体HSCT环境中的中性粒细胞和中性粒细胞数量时，应该考虑到免疫抑制剂和/或G-CSF的同时使用所产生的多重混杂效应，这似乎是合理的。因此，鉴于患者在异基因HSCT后的头几个月对感染的易感性较高，在整个免疫重建过程中的中性粒细胞功能应在从同质组患者获得的前瞻性体内外研究中进行更适当的评估。这将允许更好地评估免疫抑制剂对不同刺激下中性粒细胞反应的影响程度，以及它们的剂量依赖性效应。

最后，异基因HSCT后中性粒细胞的功能改变也可能依赖于供体来源的模式识别受体(PPRS)的遗传变异。106,107例如，对HDs及其相应受体的广泛研究表明，低反应性Toll样受体4(TLR 4)106或戊二酮3107HSC供体来源的中性粒细胞的遗传变异可能通过影响抗真菌中性粒细胞的活性，使同种异体HSCT患者更容易感染曲霉菌病。

中性粒细胞在同种异体HSCT相关并发症中的作用

除原发疾病复发外，alloHSCT通常与早期和晚期非传染性(如血管内皮综合征、aGVHD和cGVHD)和传染性并发症(如CMV重新激活)有关，这些并发症可能威胁患者的生存。如下文所述，中性粒细胞由于其不同的功能，包括净释放、ROS产生、抗原呈递和病毒内化和运输，在这些并发症的发病机制中发挥了重要作用。5).

血管内皮综合征

在早期非感染性并发症中，血管内皮综合征代表了一系列早期危及生命的并发症，常常引起患者临床状况的突然恶化。108移植物相关血栓性微血管病变(TA-TMA)是其中最常见的实体之一，同时伴有毛细血管渗漏综合征、植入综合征和特发性肺炎综合征。108TA-TMA是由微循环中的播散性血小板聚集所致，以非免疫性溶血性贫血、血小板减少、血清乳酸脱氢酶升高、分裂细胞增多、严重高血压和蛋白尿为特征。109因此，TA-TMA与预后不良和高死亡率有关，其原因是器官末端受损.108,109TA-TMA的主要触发因素被认为是由同种异体HSCT相关程序(如调理方案、CNIS或抗菌药物)或其副作用(如感染和aGVHD)引起的内皮损伤。108,109重要的是，最近的研究表明中性粒细胞参与内皮损伤和TA-TMA的发病机制，110,111,112这也是基于以前在同种异体HSCT非依赖性TMA中的发现，如血栓性血小板减少性紫癜和溶血性尿毒症综合征。108,109然而，在列出和讨论上述研究之前，110,111,112关于网状网/网游网的一些考虑是必要的。事实上，Nets/NET在疾病发病机制中的参与目前正在各种病理条件下进行研究。体内NET的支持性证据主要包括测定血液(或血清/血浆)或组织中的DNA。然而，网状网是很难追踪的，因为它们必须通过检测到三个在其结构中共定位的分子(即DNA、组蛋白和连接在染色质上的NE)来识别。毫无疑问，在许多疾病中可以发现无细胞的dna，完全独立于血清、血浆或组织中的网状结构，因此，下面描述的大多数数据必须谨慎解释。记住这些注意事项，Arai等人。110目的评价90例成人患者在预处理前、同种异体HSCT(第0天)及其后第4周血清中TA-TMA水平的预测意义。在观察到一组典型患者的dsDNA和MPO-DNA水平显著相关后，这些作者将血清NETS量化为双链DNA(DS)DNA。110多因素分析表明，当考虑到第0天与预处理水平的比值或第4周的绝对水平时，dsDNA血清水平对TA-TMA有预测作用。110此外，MPO和DNA的免疫荧光染色显示死亡的TA-TMA患者肾小球内有净沉积。110随后对103例连续的同种异体HSCT患儿(第0天、+14天、+30天、+60天和+100天)进行了纵向研究，旨在探讨内皮损伤与TA-TMA之间的机制联系。111有趣的是，中性粒细胞计数和DNA水平与同时检测到的血清CXCL 8水平呈负相关，CXCL 8是一种诱导中性粒细胞趋化和净释放的趋化因子。111由于第14天中性粒细胞被发现下调CXCR 1和CXCR 2(解释为CXCL 8内化的结果)，作者推测CXCL 8由受损的内皮细胞释放的CXCL 8可以诱导中性粒细胞释放网状结构，进而激活补体和形成微血栓。111与这一假设一致的是，接受抗C5单克隆抗体治疗的儿童在疾病解决/治疗停止时的DNA水平明显低于诊断时和治疗后4周。111最后，一项最近的病例对照研究分析了30例同种异体HSCT患者的TA-TMA(n=10)、aGVHD或cGVHD(n=10)，或无任何并发症(n进一步阐明TA-TMA的发病机制依赖于网状网、补体系统和凝血级联之间的串扰。112事实上，通过同时分析血清和/或血浆中Nets的标记物(即DNA和MPO-DNA)以及补体和凝血活性，作者发现TA-TMA患者体内Nets的释放增强，与补体激活和凝血有关。112值得注意的是，血管内皮损伤的血清标志物(即可溶性血栓调节蛋白和可溶性VCAM-1)不仅在TA-TMA中检测到，而且在GVHD患者中也能检测到，因此这两种疾病之间可能存在重叠。112总的来说，虽然在设计、队列组成、条件类型、GVHD预防方案、时间点评估和诊断标准等方面存在差异，但上述研究表明中性粒细胞通过净释放参与TA-TMA的发病机制。这与前人中性粒细胞暴露于抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)后通过净释放激活替代补体途径，最终通过膜攻击复合物(C5b-9)的组装而破坏内皮的研究相一致。113也有报道说网状网可以激活人类和小鼠的凝血系统。因此，来自ANCA相关血管炎(一种以高凝病为特征的疾病)患者的中性粒细胞释放组织因子(TF)表达的神经网络。114在小鼠模型中，凝血酶-驻留中性粒细胞也被发现通过网络相关酶激活FXII，从而导致深静脉血栓形成。115最后，先前的体内和体外研究表明，人和小鼠中性粒细胞通过释放含有丝氨酸蛋白酶的核小体，参与组织因子途径抑制剂的局部蛋白水解，从而促进了血栓形成。116凝血级联起始的主要抑制剂。另一方面，除了TA-TMA外，目前还没有关于中性粒细胞参与同种HSCT相关血管内皮综合征的数据。例如，据我们所知，目前尚无关于网状网参与肝窦阻塞综合征/静脉闭塞性疾病的资料，这是一种严重的同种异体HSCT后综合征，部分与内皮损伤有关。117最后，考虑到中性粒细胞释放Net在同种异体HSCT后被报道为受损(读者请参阅本综述中“同种异体HSCT受体免疫重建过程中中性粒细胞免疫表型和特性”一节)，重组中性粒细胞是否真的能对某些疾病相关的刺激释放网状网还有待澄清。

急性GVHD(AGVHD)

GVHD是同种异体HSCT的主要并发症之一，也是术后HSCT发病和死亡的主要原因。118它可分为急、慢性两种类型，可根据临床征象和临床表现区分，仅与传统的急性(日前+100天)和慢性(日后+100天)GVHD的传统时间分类有部分重叠。119急性GVHD(即aGVHD)仍然是同种异体HSCT患者发病和死亡的重要原因。120它实质上是由广泛的免疫机制引起的严重炎症并发症，供T细胞用来攻击被认为是“非我”的受体组织。120事实上，agvhd的病理生理学被认为是一个由以下三个阶段组成的过程：(1)调理方案引起的组织损伤，这反过来导致(2)微生物相关分子模式(Mamp)激活宿主细胞。121和危险相关的分子模式(DAPS)，随着供体(移植物)T细胞的激活和增殖，导致(3)细胞毒性损害受体(宿主)细胞和释放炎性细胞因子。120有趣的是，最近的证据表明，中性粒细胞可能通过激活供体效应T细胞在人和小鼠肠道aGVHD的发病机制中发挥作用，无论是通过促进炎症微环境。122或通过向肠系膜LNS(MLNS)中的T细胞呈递宿主抗原。123事实上，在一项使用不同同种HSCT小鼠模型的研究中，Schwab等人。122证明在受损的胃肠道中，受体激活的中性粒细胞通过ROS的产生影响aGVHD的严重程度，ROS除了对入侵的细菌产生反应外，还会损害周围/旁观者的组织细胞。后一种损伤进一步激活中性粒细胞，诱导高度炎症环境，进而促进T细胞活化，有利于GVHD的发展。122因此，抗体介导的(抗Ly6G)或由基因决定的中性粒细胞耗竭在同一动物模型中可以降低aGVHD的侵袭性和死亡率。122重要的是，同样的作者能够证明中性粒细胞的吸收是在肠道细菌进入受损的肠壁时发生的，而TLR 2-、TLR 3-、TLR 4-、TLR 7-或TLR 9缺陷中性粒细胞在野生型小鼠中的转移导致了较轻的aGVHD。122与这些发现相一致的是，对37例异基因HSCT患者的肠道组织活检的前瞻性收集，无论是否存在aGVHD，都清楚地表明，肠aGVHD的严重程度与GVHD病变中中性粒细胞的数量密切相关，并与抗硝基酪氨酸染色密切相关，以检测氧化损伤。122总之，这些数据表明，全身照射(TBI)和化疗在条件条件下会导致细菌易位到肠道组织中，从而导致中性粒细胞的产生。TLR配体局部激活中性粒细胞，ROS介导的组织损伤进一步促进T细胞分化为效应T细胞，导致aGVHD。在最近的一项体内研究中，HulsDunker等人。123已经证明，小鼠中性粒细胞也可能通过发挥APC的作用而参与aGVHD的发病机制。事实上，通过使用光转换器报告系统，这些作者能够证明，以前暴露在回肠405 nm光下的中性粒细胞在TBI预处理后7分钟内迁移到1~2天后排出mLNs。123有趣的是，中性粒细胞的迁移依赖于mLN中易位细菌(或其成分)的存在，如TBI处理的小鼠体内细菌16 SrRNA拷贝数的增加，以及抗生素治疗小鼠mLN中中性粒细胞数量的减少。123有趣的是，中性粒细胞与供体来源的T细胞在mLN中共定位，并在主要组织相容性复合物II(MHC-II)上呈现抗原。123因此，抗Ly6抗体所致的中性粒细胞耗竭与mLNs中T细胞增殖减少有关。123值得注意的是，Ruxolitinib(JAK1-JAK2抑制剂)是一种有效的抗GVHD药物，在临床环境中被证明会干扰中性粒细胞向mLNs的迁移和抗原的提呈。123此外，研究还发现，与载体处理的小鼠相比，鲁索利替尼处理的小鼠在mLN中的中性粒细胞绝对值较低，MHC-Ⅱ的表达较低。123最近，同一群人124已经证明，在接受多N-乙酰氨基葡萄糖(PNAG)主动或被动免疫的小鼠中，aGVHD相关死亡率有所降低。PNAG是一种保守的微生物表面多糖，由多种病原体在小鼠aGVHD模型中表达。有趣的是，PNAG的靶向性降低了小鼠回肠中不受控制的中性粒细胞活化，进而有利于消除嗜酸性细菌。124最后，在小鼠的aGVHD模型中，发现异基因T细胞衍生的GM-CSF可以通过释放炎症介质和ROS，使供体来源的吞噬细胞(包括中性粒细胞)损害宿主组织。125

综上所述，上述研究报告122,123确认预处理方案诱导的组织损伤作为aGVHD的早期触发因素，可导致阻尼和MAMP的释放。在这种情况下，中性粒细胞似乎通过放大损伤对组织损伤和细菌移位反应非常有效。122促进异基因T细胞活化。123尽管有这些令人信服的实验证据，但降低某些调节方案的强度是否会限制人类中性粒细胞的活化程度，仍有待确定。此外，重要的是要弄清楚病人和移植物中性粒细胞在调理治疗后能存活多久(尽管是在由促炎细胞因子释放引起的炎症环境中)。126)。同样重要的是要弄清楚残留的病人和重建的供体来源的中性粒细胞是否能够维持强大的炎症活动，尽管使用免疫抑制性预防药物。

慢性GVHD(CGVHD)

CGVHD是导致同种异体HSCT患者晚期不复发的主要原因。127临床上，cGVHD是一种多器官综合征，涉及组织炎症和纤维化，常导致永久性器官功能障碍。127CGVHD的病理生理学涉及异基因反应和调节失调的T细胞和B细胞与天然免疫群体(包括巨噬细胞、DC和中性粒细胞)之间的多种不同的相互作用，最终导致促纤维通路的启动和繁殖。128眼cGVHD在同种异体HSCT患者中较为常见。129眼cGVHD的症状和体征包括眼部不适、泪液不足伴角膜和结膜上皮病变、眼睑疾病伴梅博曼腺(MG)萎缩、眼表面炎症和瘢痕化以及上缘角膜结膜炎。129中性粒细胞主要通过释放网状网参与眼内cGVHD的发病。事实上，在一项研究中，包括30名眼部cGVHD患者，18名无HDs和20名HDs患者。129免疫荧光染色显示，cGVHD患者的粘液细胞聚集物和眼表面冲洗液中存在大量Nets。相应地，脑源性神经营养因子(α)、脑源性神经营养因子(BDNF)、表皮生长因子M(OSM)、中性粒细胞明胶酶相关脂钙蛋白(NGAL)和光/TNFSF 14在眼cGVHD患者的眼表冲洗液中检测到的MPO-和NE-DNA复合物和净相关蛋白[NE、MPO、CXCL 8、TNF-α、脑源性神经营养因子(BDNF)、中性粒细胞明胶酶相关脂钙蛋白(NGAL)和光/TNFSF 14]水平高于非眼源性cGVHD患者129值得注意的是，除肿瘤坏死因子-α外，在pMA刺激的人中性粒细胞的上清液中检测到了同样的蛋白质和细胞因子(除肿瘤坏死因子-α外)。129此外，眼cGVHD患者眼表面冲洗液中中性粒细胞多于上皮细胞，其疾病严重程度更大。129在培养的人角膜上皮细胞中，加入PMA刺激的中性粒细胞作为网状网的来源，可延缓划痕愈合，并诱导上皮间充质转化。129在体外，网状网还能促进培养的人结膜成纤维细胞的增殖，诱导肌成纤维细胞的强烈转化，引起胶原基质的收缩，显著降低MG细胞的增殖和分化。129重要的是，体内实验表明，在小鼠角膜上长期应用网状结构可导致上皮病变和延迟的上皮伤口愈合。129此外，肝素对网状网的破坏也减少了体内和体外的所有净介导效应。129值得注意的是，同样的作者也能识别出与网络介导的致病作用最相关的相关酶或细胞因子，表明OSM和LIGHT/TNFSF 14是上皮病和T细胞增殖的主要诱导剂，NGAL是MG上皮细胞增殖和分化的主要抑制因子。129

如前所述，中性粒细胞可能发挥相反的作用，取决于他们受到的刺激。根据这一观点，最近的证据表明，cGVHD患者的中性粒细胞在体外光移植(ECP)后获得免疫抑制特性，ECP是一种免疫调节程序，用于治疗对类固醇耐药的aGVHD或cGVHD。130ECP由患者全血白细胞的分离和8-甲氧基补骨脂烯(8-MOP)和UVA光照射后的再灌注组成。130虽然ECP的治疗机制尚不完全清楚，但T细胞和DC一直被认为是主要靶点。130然而，Franklin等人。131最近的研究表明，中性粒细胞在ECP过程中占白细胞总数的绝大部分，在化疗过程中，中性粒细胞会发生一定程度的凋亡，并失去其炎症特性。因此，cGVHD患者经化学辐照的Buffy外套中获得的中性粒细胞在培养24h后凋亡率增加，而剩余的活细胞部分出现活化标记物(CD 16、CD 54和CD11b的丢失)。131LPS体外刺激24h后，与非化学照射的HDs中性粒细胞相比，化疗照射后患者中性粒细胞分泌CXCL 8和CCl 4减少，Arg-1释放增加。131与cGVHD患者ECP前外周血中分离的中性粒细胞相比较，cgvhd后24h分离的中性粒细胞凋亡率高，CCl 4分泌减少，体外刺激24h后Arg-1释放增加。131。重要的是，ECP后24h分离的中性粒细胞能够抑制自体和异源T细胞的体外增殖。131与体外实验结果一致的是，8-MOP和UVA体外处理HD中性粒细胞加速了其自发凋亡，并降低了存活中性粒细胞活化标记物(CD 16和CD 54)的表达，从而复制了体外实验数据。131此外，与对照组相比，经PMA 24 h体外刺激后，HDs中性粒细胞的ROS和NO生产能力均较对照组降低，而加LPS的培养24h则增加了Arg-1的释放。131

有趣的是，随后来自同一作者的体外研究132证明8-MOP和UVA处理的中性粒细胞不能激活自体DC，不能诱导其上调CD 80、CD 83和程序性死亡配体1(PD-L1)，释放IL-10、TNF-α和IL-12p 70。在相同的实验环境中，中性粒细胞也能抑制LPS诱导的DC和IFNγ诱导的DC的活化。132与化学辐照中性粒细胞共同培养的DC在混合淋巴细胞反应中表现出明显的异源刺激活性降低。132与其他APC(即单核细胞和巨噬细胞)培养的中性粒细胞相似。132总的来说，上述两项研究131,132提示ECP患者的中性粒细胞通过直接或间接抑制T细胞的激活而获得控制cGVHD的能力。

Rieber等人43以前曾在受aGVHD或cGVHD影响的患者的外周血中描述过一群功能活跃的CD 33。高CD66b高赫拉博士低层伊尔-4R+CXCR 4+LDN/PMN-MDSCs在ECP处理后显著扩张。尽管如此，由于NDNS在ECP患者的白细胞中广泛存在于LDN之上，131可以推测，NDNS，而不是LDNS/PMN-MDSCs，是ECP免疫抑制活性的主要效应因子。

巨细胞病毒(CMV)再激活

中性粒细胞参与抗病毒免疫反应，但它们介导的影响可能对宿主有益或有害，这取决于病毒感染的类型。133人巨细胞病毒(Hcmv)是一种β-疱疹病毒，在bm-驻留的CD 34中建立终身潜伏感染。+细胞和CD 33+受感染免疫活性个体的髓系祖细胞。134HCMV再激活是同种异体HSCT后最常见的机会性感染。134也是不良结果的预兆。135,136事实上，HCMV血清学阳性的同种异体HSCT受体HCMV重新激活和早期及晚期不复发死亡的风险增加。135,136有趣的是，文献中的数据表明，虽然不能有效地维持病毒的完全复制，137,138HCMV具有利用和逃避宿主免疫系统的能力，以保证宿主自身的传播和长期生存。139,140从这个角度来看，中性粒细胞在被招募到HCMV感染的地点后，被证明作为携带者参与HCMV的传播。141因此，在跨内皮迁移实验中，与对照组相比，人中性粒细胞优先向HCMV感染的内皮细胞上清液迁移，并与HCMV感染的内皮细胞共培养(即细胞间接触)，进一步表达CMV结构蛋白pp 65。141虽然HCMV感染的内皮细胞释放的CXCL 8最初被认为是主要的中性粒细胞趋化因子，但随后对HCMV(Toledo株)的测序研究发现了两个病毒基因，即，UL146和UL147，具有令人联想起人类CXCL 8的序列基序。142在体外研究，其产物是UL146，vcxcl-1是一种强效的中性粒细胞趋化因子。142这也被发现通过CXCR 1和CXCR 2结合成为中性粒细胞的靶点。143最近，在感染表达HCMV编码的vCXCL-1的重组小鼠CMV(MCMV)小鼠模型上进行的一项体内研究表明，vCXCL-1能够促进MCMV的传播，从而代表一种毒力因子。140除了作为载体的作用外，人类中性粒细胞对HCMV的反应也显着地提高了存活率。144因此，在体外接触临床HCMV分离物Merlin后，中性粒细胞被发现通过NF-kB和ERK 1/2的激活和相应的抗凋亡蛋白MCL-1的稳定来延缓自身的凋亡。144此外，感染相同hcmv株的人中性粒细胞(而非单核细胞)的无病毒上清液在体外对新近分离的中性粒细胞具有较强的抗凋亡作用，这可能是由于肿瘤坏死因子-α、IL-6和cxCL 8等亲存活分子浓度较高所致。144体外实验还表明，人中性粒细胞不杀伤HCMV感染的单核细胞，原因是感染的单核细胞抑制了中性粒细胞趋化因子(S100A8/A9)的分泌。145然而，与中性粒细胞对CMV的支持作用不同，在小鼠原发性MCMV感染模型中进行的一项体内研究报告称，中性粒细胞在感染组织中通过CXCL-1介导的招募发挥TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)介导的抗MCMV活性。146

尽管在人类和小鼠模型中，关于中性粒细胞和CMV之间潜在相互作用的研究成果越来越多，但仍有许多有待定义和澄清的地方。特别是，据我们所知，目前还没有从同种异体HSCT患者体内分析超纯中性粒细胞的研究，无论是否有HCMV重新激活。这些研究将有助于明确界定，例如，携带HCMV的中性粒细胞所表达和释放的细胞因子和趋化因子的模式、它们的表型特征或未知的功能反应。同样，没有研究详细分析hcmv再激活与gvhd之间是否存在临床已知的关系。147可以用生存的增加来解释144和促炎态度142感染的中性粒细胞。我们认为，这些后一项研究是紧迫的，因为中性粒细胞是第一次重组细胞，并且几乎是免疫系统中的唯一参与者，在同种异体HSCT后的头几个月，HCMV通常会重新激活并发生aGVHD。

结论和观点

很明显，中性粒细胞参与整个异体HSCT的整个过程，以及与异体HSCT相关的并发症(图一)。6)。事实上，中性粒细胞存在于移植物制品中，主要存在于G-CSF动员的PBSCs中，并在HSC注入后迅速重建为几乎完全有效的细胞。然而，尽管这里的数据被重新概括，在异体HSCT环境中中性粒细胞的功能仍有许多有待探索的地方。事实上，中性粒细胞在人类同种异体hsct中所起的作用一直被忽视，特别是考虑到近年来发现的多种新的生物活动。11(无花果)1)。正如在本综述中已经提到的，我们正在进行研究，以确定未成熟和成熟中性粒细胞在G-CSF动员的HSC产品中的有效比例和免疫调节潜力，它们的确切存活，它们可能对细胞因子风暴的反应和/或对细胞因子风暴的贡献，以及它们在受体体内所遇到的湿气/MAMP的类型和数量，取决于方案强度。免疫重建的特点是迅速恢复正常数量的中性粒细胞，具有成熟的表型。然而，这些细胞的功能可能也应该从用于GVHD预防和/或治疗的免疫抑制药物的类型和血浆水平、最终的G-CSF治疗和病毒感染的水平来评估。此外，应注意中性粒细胞可能与不同类型的重组细胞之间的相互作用，这些细胞的组成(即从先天免疫细胞到逐渐具有能力的适应性免疫细胞)可能随着时间的推移而变化。中性粒细胞也可与异体HSCT后注入的细胞相互作用，例如用于治疗GVHD和原发疾病复发的第三方MSCs和供体淋巴细胞。最后，中性粒细胞在许多同种异体HSCT相关并发症中的作用仍有待探讨.