ATM和ATR激酶通过靶向KIFC 1磷酸化调节中心体聚集和肿瘤复发

耐药和肿瘤复发是肿瘤治疗的主要挑战。癌细胞常表现为中心体放大。为了维持生存，癌细胞通过聚集多余的中心体来实现双极分裂。因此，靶向中心体聚类被认为是一种很有前途的治疗策略。然而，中心体聚类的调控机制尚不清楚。在这里，我们报告说，KIFC 1是一种中心体聚类调节剂，与肿瘤复发呈正相关。在DNA损伤处理下，ATM和ATR激酶在Ser26处磷酸化KIFC 1，通过中心体聚集有选择地维持癌细胞的存活，导致耐药性和肿瘤复发。抑制KIFC 1磷酸化可抑制中心体聚集和肿瘤复发。本研究将KIFC 1作为肿瘤复发的预后指标，提示在DNA损伤应激下，肿瘤可通过触发中心体聚集而获得治疗耐药性和复发，提示阻断KIFC 1磷酸化可能为肿瘤治疗开辟新的前景。

染色体不稳定(CIN)被广泛认为是许多肿瘤的特征之一。1,2,3,4,5。CIN有助于肿瘤的异质性，并与放疗耐药或耐药增加、患者预后不良和肿瘤复发的高风险呈正相关。6,7,8。多生中心体(产生两个以上的中心体)在人类癌症中很常见，与CIN有关。有多生中心体的癌细胞要么由于多极有丝分裂产生高水平的非整倍体而死亡，要么通过将其中心体聚集成两个功能极来分裂并产生可行的后代，这种过程称为中心体聚类。9,10,11。发生中心体聚集的癌细胞有较长的时间形成假双极纺锤体，单个运动杂务往往附着在来自不同极性的微管上，在后期会产生滞后性染色体。9,10。越来越多的证据表明，中心体聚类是CIN的重要机制，靶向中心体聚类被认为是一种很有前途的治疗干预手段。10,12。然而，中心体聚集的调控机制及其在肿瘤治疗中的作用尚不清楚。此外，越来越多的证据表明dna损伤促进了中心体的扩增。13,14,15，而发生中心体聚集的癌细胞往往具有侵袭性。2。因此，寻找中心体聚集的驱动机制是指导精确癌症治疗的迫切需要。

激肽样蛋白kifc 1，是kinesin-14家族中一种非必需的负定向运动。10,12,16,17，最近在有丝分裂过程中，在人癌细胞多生中心体的双焦点聚类中发挥了重要作用。10,18,19。有趣的是，KIFC 1的缺失会导致多极后期急剧增加，并因灾难性的多极分裂而引发癌细胞死亡，而击倒KIF 1对两个中心体细胞的分裂几乎没有影响。10。临床标本显示KIFC 1在卵巢腺癌、肝细胞癌和乳腺癌中高表达。20,21,22。因此，在肿瘤治疗中抑制KIFC 1是一种很有前途的预防CIN和细胞侵袭的策略。不幸的是，现有的kifc 1抑制剂要么缺乏效力和特异性，要么具有不利的毒性作用。18,23,24。因此，对控制KIF 1表达和功能的调控机制的全面研究可能为预防肿瘤治疗的耐药、复发和转移提供新的见解。

在这项研究中，我们发现KIFC 1是临床癌症复发的潜在标志。DNA损伤诱导疗法激活DNA损伤反应激酶ATM和ATR，在Ser26处磷酸化KIFC 1。KIFC 1在体内和体外均稳定于磷酸化，从而促进中心体聚集、CIN和肿瘤复发。阻断KIFC 1磷酸化可明显防止DNA损伤引起的CIN和肿瘤复发。这些结果为研究DNA损伤治疗导致CIN和治疗耐药的机制提供了新的思路，提示靶向KIFC 1磷酸化可能为减少肿瘤转移和复发提供新的机会。

KIFC 1预测肿瘤复发

越来越多的证据表明，中心体聚集是CIN的重要来源。10,12CIN与患者预后及肿瘤复发密切相关。6,7,8，因此我们用乳房评估KIFC 1的预后价值。n=140)和大肠癌(n83)组织微阵列。我们用抗KIFC 1抗体对肿瘤组织微阵列进行染色，并根据免疫组织化学(IHC)评分将其分为低、中、高表达组。结果表明，KIFC 1的表达与人乳腺肿瘤的复发呈正相关，但与年龄无关。1A-c)。在肿瘤复发组，约70%的乳腺癌患者表现出高表达的KIFC 1(IHC评分≥8)(如图所示)。1B)。KIFC 1蛋白高表达的乳腺癌患者的生存率明显低于低KIFC 1表达的乳腺癌患者(图一)。1D)。同样，KIFC 1蛋白水平与结直肠肿瘤复发呈正相关，但与年龄和性别无关。1E-g)。高表达KIFC 1的大肠癌患者的生存率也明显下降(图一)。氢)。此外，结直肠肿瘤组织中KIFC 1蛋白水平高于成对癌周组织(图1)。S1a，b)。这些结果提示，KIFC 1的高表达是乳腺癌和结直肠癌复发的不良预后生物标志物。

DNA损伤处理诱导中心体聚集蛋白kifc 1

肿瘤复发往往与肿瘤治疗过程中的耐药有关。因此，我们选择了四个乳腺癌患者衍生异种移植(PDX)模型(BRPF 212，BRPF 280，BRPF 232和BRPF 008)。S2)分析顺铂、依托泊苷等常规化疗药物治疗后KIFC 1蛋白水平的变化。结果表明，顺铂和依托泊苷均能显著增强PDX组织中KIFC 1的表达。2A)，表明DNA损伤治疗促进了KIFC 1蛋白在体内的积累。

为了证实上述结果，我们接下来使用代表不同类型人类癌症的多个癌细胞株，研究了不同的DNA损伤治疗对KIFC 1表达的影响。结果表明，X射线照射(IR)诱导dna双链断裂。25)，紫外线，诱导dna单链断裂。25，9种dna损伤药物显著增加kifc 1和γh2ax(一种dna损伤标记物)。26)人乳腺癌组织中MDA-MB-231细胞的表达。2B)。此外，依托泊苷治疗促进了KIFC 1在六种不同类型的肿瘤细胞中的表达。2C足叶乙甙、顺铂和IR可明显增强MDA-MB-231裸鼠移植瘤的KIFC 1染色。二维空间)。这些结果表明，DNA损伤疗法在体外和体内都能促进KIFC 1的积累。

DNA损伤处理诱导kifc 1依赖的中心体聚集

以前的研究表明，DNA损伤增加了中心体扩增(CA)。13,14,15而中心体聚集对含有多生中心体的癌细胞的存活至关重要。5。由于上述数据显示DNA损伤处理导致KIFC 1表达显著增加，我们接下来评估了DNA损伤处理在调节中心体聚类中的作用。首先，我们证实DNA损伤处理后，MDA-MB-231细胞的中心体扩增率(>2细胞)增加(36%的CA在0h，41%的CA在15h，50%的CA在48h)。S3A)。值得注意的是，有丝分裂细胞在尾泊苷处理后15h和48h，中心体聚集与非有效中心体聚集的比例显著增加(图1)。S3b)。为了排除DNA损伤剂在48h诱导细胞凋亡的影响，我们选用依托泊苷治疗后15 h，准确、方便地检测中心体聚集的频率。结果表明，IR和依托泊苷处理显著提高了有丝分裂细胞的中心体聚集率，但降低了多种肿瘤细胞株的无效率中心体聚集(如中心蛋白染色所示)的发生(如图1所示)。3A，b)。其他DNA损伤处理的细胞(包括顺铂、奥沙利铂、丝裂霉素C、雌二醇、表阿霉素、吉西他滨、博莱霉素和CTX)也有类似的结果。3C)。此外，我们观察到，KIFC 1的敲除降低了依托泊苷诱导的中心体聚集增强，同时也增加了依托泊苷处理细胞的多极中心体(图一)。三维空间)，表明kifc 1是依托泊苷诱导的中心体聚集所必需的。此外，在体内使用PDX组织进行研究(见图)。3E)和MDA-MB-231异种移植物肿瘤(如图所示)。3F)在裸鼠体内，DNA损伤处理可诱导中心体聚集明显增强，同时减少非有效聚类。这些结果表明，DNA损伤治疗导致KIF 1表达增强，导致KIFC 1依赖于肿瘤细胞的中心体聚集。

在dna损伤条件下atm和atr激酶磷酸化kifc1-s26

其次，我们研究了KIFC 1在DNA损伤后积累的机制。结果表明，依托泊苷能显著延缓KIFC 1蛋白的降解。4A)而不改变它的转录(图。4B)。另外，依托泊苷和顺铂均能降低KIFC 1的泛素化。4C)，表明DNA损伤剂导致KIFC 1蛋白的稳定。DNA修复途径的核心成分是共济失调、毛细血管扩张症(Atm)和变性共济失调(ataxia telangiectasia，atr)和Rad3相关激酶(rad3-relatedkinases，ATR)。27,28,29。DNA双链或单链断裂激活atm和atr25导致dna损伤反应中几个关键分子的磷酸化，如chk 1和chk 2激酶。26,30。为了研究这些激酶是否调节KIFC 1蛋白的稳定性，我们使用了AZD 1390(atm抑制剂)。31、AZD 6738(ATR抑制剂)32，VE-822(5μM时ATR和ATR的抑制剂)33,34,35、MK-8776(CHK 1抑制剂)和C 3742(Chk 2抑制剂)。结果表明，VE-822、AZD 1390和AZD 6738对依托泊苷诱导的KIFC 1上调有明显抑制作用，而MK-8776和C 3742则无明显抑制作用。4D)。此外，ATM和ATR的敲除明显降低了依托泊苷诱导的KIFC 1上调(图1)。4E)。这些结果表明，ATM和ATR都是DNA损伤诱导的KIFC 1积累所必需的。

接下来我们研究了在DNA损伤后ATM和ATR激酶是否磷酸化KIFC 1。结果表明，在依托泊苷存在或不存在时，内源性Flat-KIFC 1与atm和atr相互作用(p-atm和γH_2AX显示了DNA损伤反应的激活)。4F)。依托泊苷治疗明显增加KIFC 1磷酸化，用一种针对ATM/ATR共同底物的磷酸-S/TQ抗体检测到KIFC 1的磷酸化(如图1所示)。4G)。LC-MS/MS分析确定了KIFC 1中的8个磷酸化位点(图1)。4H还有无花果。S4)，但只有S26符合ATM/ATR基片S/T-Q基序。因此，我们产生了一种KIFC 1膦S26特异性抗体，并验证了其特异性。4I进一步证实，依托泊苷可明显诱导内源性和外源性KIFC1-S26磷酸化。4J，k)，可以通过加入ATM或ATR抑制剂来消除(如图所示)。4K)。此外，ATR-sh细胞中KIFC1-S26磷酸化的激活速度快于ATM-sh细胞(图1)。S5a)，说明KIFC1-S26磷酸化的激活具有不同的动力学。与依托泊苷处理后双链断裂激活atr相比，停滞复制叉激活atr所需时间更长。28,29。其他损伤dna的疗法，如喜树碱(Cpt)36和电离辐射37还可诱导KIFC1-S26磷酸化。S5b，c)。这些结果共同证实，在DNA损伤后，ATM和ATR在S26上磷酸化了KIFC 1。

KIFC 1-S26磷酸化促进中心体聚类

为了研究KIFC1-S26磷酸化在调节中心体聚集中的作用，用野生型(WT)、缺磷型(S26A)或类似于内源性KIFC 1的标记标记的KIFC 1在MDA-MB-231细胞中替代KIFC 1(如图1所示)。5A避免由KIFC 1过表达引起的微管束和较长的纺锤体。S6)38,39。利用这些细胞株，我们观察到KIFC1-WT的稳定性高于S26A突变体，但远低于S26D突变体的稳定性。5B)。S26D突变体与KIFC-WT相比，S26A突变体泛素化程度增加，依托泊苷治疗导致野生型的泛素化减少，而突变型KIFC 1的泛素化程度下降(图1)。5C)。这些结果表明，KIFC1-S26磷酸化通过抑制KIFC 1的泛素化而稳定KIFC 1。

免疫荧光分析表明，KIFC1-S26A突变细胞的中心体扩增率低于KIFC1-WT和KIFC1-S26D突变细胞，且均在48h时通过依托泊苷诱导。5D)。KIFC 1基因敲除可显著降低KIFC 1与多极有丝分裂偶联的中心体聚集频率，KIFC-WT细胞中心体聚集率显著增加，多极有丝分裂率显著降低，依托泊苷可增加野生型KIFC 1细胞(SUN和KIFC1-WT)中心体聚集的频率，而KIFC 1突变株(S26A和S26D)的细胞中心体聚集率不明显(见图)。5E)。ATM/ATR抑制剂VE-822明显抑制依托泊苷诱导的KIFC-WT细胞中心体聚集增强，但对KIFC 1突变体(S26A和S26D)细胞无明显抑制作用。5F)。这些结果提示，DNA损伤处理以KIFC1-S26磷酸化依赖方式促进中心体聚集。

KIFC 1-S26磷酸化诱导耐药

KIFC 1也与核进口有关。40,41和一种无心纺锤体组织42。因此，我们进一步分析了KIFC1-S26磷酸化对细胞周期进程的影响。S7a)40、核膜(图1.S7b)40，以及房顶杆(图1.S8)。与KIFC1-WT和S26D细胞相比，KIFC1-S26A细胞的S期和G2/M期略有延长。S7a)。在KIFC 1挽救的稳定细胞系中，DNA损伤程度和异常核膜百分率无显着性差异(图2和>2中心体)。S7b，c)。经足叶乙甙治疗后，有两个中心体的细胞中无丝粒极的比例明显增加到30-38%(见图)。S8a，d)。然而，有2个中心体的KIFC1-S26A细胞在DNA损伤后，含有附加极结构的多极纺锤体的频率明显增加(如图1所示)。S8a，d)。中心体聚集是肿瘤细胞存活的关键。因此，我们得出结论，在KIFC-S26A细胞中，无效率的中心体聚集(在有额外中心体的细胞中)和无中心体极诱导的多极纺锤体(两个中心体细胞)可能会增加对依托泊苷治疗的敏感性。

因此，我们用MDA-MB-231细胞研究了KIFC1-S26磷酸化在耐药中的作用，其中中心体扩增的百分比为36%，经依托泊苷治疗后进一步增加到50%，如图所示。5D。KIFC1-S26A细胞凋亡增加(活化的caspase-3和裂解的PARP)。S8c)。KIFC 1基因敲除明显增强依托泊苷诱导的细胞死亡，KIFC1-S26A突变型细胞对依托泊苷治疗的敏感性高于KIFC1-WT-获救细胞和KIFC1-S26D拯救细胞。6A)。ATM和ATR抑制剂VE-822显著增加了依托泊苷诱导的KIFC-WT细胞死亡，而在KIFC 1突变体(S26A和S26D)中略有增加。6B)。给予维生素E-822也可以阻止dna的修复，从而使dna损伤的治疗变得敏感。34我们认为VE-822通过抑制中心体聚集和防止DNA修复对足叶乙甙的治疗有增敏作用。ATM/ATR诱导的KIFC1-S26磷酸化共同促进耐药。

利用KIFC1-WT、KIFC1-S26A或KIFC1-S26D诱导的小鼠肿瘤移植瘤模型，观察KIFC1-S26磷酸化对耐药小鼠体内活性的影响。结果表明，KIFC1-S26A移植瘤对足叶乙甙的敏感性高于KIFC1-WT和KIFC1-S26D(通过降低肿瘤体积和重量观察)。6C-E)。肿瘤切片的γ-微管蛋白染色发现，KIFC1-S26D异种移植瘤的中心体聚集率明显增加，多极有丝分裂的频率明显降低，依托泊苷治疗特别增加了KIFC1-WT的中心体聚集，但KIFC1-S26A/D异种移植物肿瘤的中心体聚集不明显(见图)。6f)。此外，ATM/ATR抑制剂VE-822致敏异种移植瘤对足叶乙甙的治疗效果如图所示。6g-i肿瘤切片分析显示VE-822降低了中心体聚集的频率。6J)。为了进一步研究VE-822对肿瘤生长的抑制作用，我们用一株具有诱导性CA的HeLa单克隆细胞株(Teton-Plk 4细胞株，经强力霉素处理后，CA的百分率从11%提高到~80%)，在裸鼠体内移植瘤，进一步研究VE-822对肿瘤生长的抑制作用。2,43,44，或MDA-MB-231细胞(CA高频率)。多西环素处理后，诱导的CA细胞明显诱导Plk 4过表达和中心体扩增。S9a，b)。VE-822对诱导性CA(DOX+)和MDA-MB-231细胞的肿瘤体积和重量有明显的抑制作用，而对诱导型CA(DOX−)和HeLa+细胞(DOX+)的肿瘤细胞无明显抑制作用。S9C-E)。提示VE-822能抑制CA高频率肿瘤的生长.在依托泊苷诱导的中心体扩增肿瘤中，VE-822使异种移植瘤对依托泊苷治疗敏感.

以上结果表明，KIFC1-S26磷酸化促进了依托泊苷治疗后多中心体癌细胞的存活，而VE-822在体外和体内均能抑制这种作用。

KIFC1-S26磷酸化诱导染色体不稳定

多极有丝分裂导致肿瘤细胞的非整倍体水平高于假双极有丝分裂(中心体聚集)。然而，多极有丝分裂的细胞可能由于高水平的非整倍体而死亡，而这些细胞的后代通常是不可行的。9。相反，接受中心体聚集的肿瘤细胞可以存活并进一步增殖。随着癌细胞的增殖，中心体聚类诱导的迟滞染色体促进CIN的发生。2,9,43,45。因此，我们接下来评估了KIFC1-S26磷酸化对中心体聚类诱导的迟滞染色体百分率的影响。免疫荧光染色显示，在KIFC1-S26D细胞株中，中心体聚集诱导的迟滞染色体百分率(~25%)明显高于KIFC1-S26A细胞株(~8%)。依托泊苷处理使KIFC-WT细胞和正常对照细胞的中心体聚类所致迟滞染色体频率增加，而对KIFC 1突变体(S26A和S26D)细胞则无明显影响。VE-822处理可明显降低依托泊苷诱导的KIFC-WT细胞和正常对照细胞迟滞染色体频率的增加(图1)。7A)。这些结果表明，KIFC1-S26磷酸化导致中心体聚类导致染色体滞后的倾向。

为了进一步证实kifc 1-s26磷酸化与cIN的关系，我们采用非转化人乳腺上皮细胞株mcf-10a，其中心体扩增率为8%，经依托泊苷治疗后进一步提高到30%。2...获得KIFC 1(WT、S26A和S26D)的MCF-10A细胞株。7b)，我们观察到类似于KIFC 1拯救的MDA-MB-231细胞株在中心体扩增和聚集上的变化(如图所示)。7C，d)。用低浓度依托泊苷处理KIFC 1的MCF-10A细胞系30代，用存活的细胞检测CIN的发生频率。结果表明，KIFC1-WT和KIFC1-S26D细胞的非整倍体百分率(每细胞染色体数大于或小于46条)显著高于KIFC1-S26A细胞和未经处理的MCF-10A细胞。7E)。第3和第7染色体荧光原位杂交分析表明，KIFC-WT和KIFC1-S26D细胞株，而KIFC-S26A细胞株，30代后异倍体增加。7F)。在不加依托泊苷的情况下，KIFC1-WT和KIFC1-S26A细胞的非整倍体比例较低，与未处理的MCF-10A细胞相似，说明依托泊苷诱导的中心体扩增和聚集是CIN发生的必要条件。7E，f)。这些结果表明，KIFC1-S26磷酸化促进了DNA损伤剂处理后的CIN。

ATM/ATR-KIFC 1-中心体聚集途径促进肿瘤复发

中心体聚集导致CIN并导致肿瘤异质性，从而加速恶性特征的发展。7,46...我们发现KIFC1-S26磷酸化促进了CIN细胞的中心体聚集，提高了细胞的存活率。因此，我们认为，经过中心体聚集的存活细胞可能成为肿瘤复发的潜在种子细胞。为了评估这一假说，我们使用KIFC1-WT、KIFC1-S26A和KIFC1-S26D分别拯救了MDA-MB-231细胞株，并检测了单用依托泊苷和与PBS、VE-822或CW 069联合作用下肿瘤的生长和复发情况。8A)。结果表明，用VE-822或CW 069治疗的kifc 1-WT异种移植瘤和kifc 1-s26a异种移植瘤均达到300 mm。3在~2个月内，KIFC-WT和KIFC-S26D肿瘤仅在1个月内就达到相同的体积。8B)。KIFC1-WT和KIFC1-S26D肿瘤治疗后CIN的发生率(40%)明显高于KIFC1-S26A细胞(约20%)。8C)。第3和7号染色体的FISH分析进一步证实，KIFC-WT-和KIFC-S26D细胞，而不是KIFC-S26A细胞，具有较高的CIN活性。8D)。术后150天观察，采用Kaplan-Meier分析法，以一个可触及的肿瘤作为肿瘤复发的标准。我们发现携带KIFC1-WT肿瘤的小鼠(10例中有3例)和KIFC1-S26D瘤(10例中有4例)在手术切除肿瘤后至少120天内原位复发。KIFC1-S26A荷瘤小鼠和KIFC1-WT肿瘤联合VE-822或CW 069治疗小鼠均无复发。8E)。此外，小鼠携带救援-WT(n=2)及救援-S26D(n(3)肿瘤与肺远距离复发(图3)。8F)。染色体数目和FISH分析也证实复发-WT和S26D的肿瘤细胞的CIN水平高于未处理的MDA-MB-231细胞(如图所示)。8g，h)。结果表明，KIFC1-S26磷酸化通过增加CIN促进肿瘤局部和远处复发，VE-822或CW 069治疗可预防依托泊苷治疗后肿瘤复发。

虽然放疗和化疗是目前治疗癌症的有效方法，但治疗耐药性和肿瘤复发仍是主要的负面并发症。先前的研究表明，CIN在癌症治疗中会产生耐药性，并增加肿瘤复发的风险。6,7,8,47,48，中心体聚类对CIN有一定的促进作用。9。然而，对中心体聚集的调控机制及其在肿瘤治疗中的作用仍知之甚少。在这项研究中，我们证明KIFC 1是人类乳腺癌和结肠癌复发的一个生物标志物。DNA损伤治疗，包括放射治疗和化疗，促进了KIFC 1磷酸化依赖的中心体聚集和细胞的存活。KIFC1-S26磷酸化导致CIN和肿瘤的体内外复发。此外，我们还发现，KIFC 1磷酸化的药理抑制能明显抑制化疗后的中心体聚集和肿瘤复发。这些结果表明，DNA损伤诱导的KIFC 1磷酸化促进了CIN细胞的中心体聚集和存活，从而增加了肿瘤转移和复发的风险。值得注意的是，大多数人类癌症缺乏预测临床反应、肿瘤复发或患者生存的生物标志物。在这项研究中，我们不仅发现KIFC 1是人类乳腺癌和结肠癌复发的一个潜在的生物标志物，而且我们还发现DNA损伤治疗显著增加了KIFC-S26的磷酸化，从而导致中心体扩增的癌细胞存活。因此，进一步探索将KIFC1-S26磷酸化作为DNA损伤、治疗耐药性和肿瘤复发的一种更特异的生物标志物，将是一项耐人寻味的工作。

DNA损伤剂如IR和化疗药物可引起DNA损伤，产生突变或大规模的基因组畸变。含有dna损伤的癌细胞激活复杂的信号网络，决定细胞的命运，不仅促进dna的修复和存活，而且还会引发凋亡、坏死或衰老。49。Atm和atr作为网络的核心部件，磷酸化了大量的蛋白质，这些蛋白质要么帮助细胞存活，要么使它们注定要经历细胞死亡。27。我们的研究表明，ATM和ATR在DNA损伤后可诱导KIFC1-S26磷酸化依赖的中心体聚集和中心体扩增的癌细胞存活。存活的细胞具有较高的CIN、侵袭性和耐药性，可作为肿瘤复发的种子细胞。ATM/ATR衍生于中心体扩增的癌细胞中心体聚集，为研究肿瘤细胞对DNA损伤、CIN和肿瘤复发的耐药性提供了一种新的方法。

蛋白质翻译后修饰是调节细胞功能和活动的关键步骤。此前的一项研究报道，CDK 1在有丝分裂过程中在Ser6处磷酸化了KIFC 1，以稳定KIFC 1蛋白水平。50。本研究表明，在DNA损伤条件下，ATM/ATR磷酸化KIFC1-S26，通过减少KIFC 1的泛素化，提高KIFC 1的稳定性，从而促进KIFC 1在胁迫条件下的活性，提示了KIFC 1在应激条件下的调节机制。此外，我们还在体外用LC/MS/MS鉴定了其他7个特定的KIFC 1磷酸化位点，包括S6、S31、S33、S71、T 326、T 346和S 494。在正常和应激条件下，确定这些修饰是否影响其细胞和生物学功能及活动是很重要的。虽然CW 069和VE-822不是KIFC 1或KIFC-S26磷酸化的特异性抑制剂，但它们都通过抑制KIFC 1来防止肿瘤复发。在本研究中，他们被用来说明KIFC 1或S26磷酸化抑制在DNA损伤治疗中的意义。开发特异性靶向KIFC-S26磷酸化的小分子化合物是治疗肿瘤复发的一种有希望的治疗策略。

总之，我们认为，DNA损伤诱导治疗，如IR和化疗药物，不仅会破坏癌细胞的DNA，还会触发ATM/ATR-KIFC 1磷酸化-中心体聚集途径，选择性地维持中心体扩增的癌细胞的存活，进而导致CIN、转移和肿瘤复发。与此模型相一致的是，KIFC1-S26磷酸化的药物抑制通过阻断中心体聚集而诱导多极细胞分裂和细胞死亡，从而抑制肿瘤的恶性转化和DNA损伤治疗后的复发率。据我们所知，这是第一项研究表明，DNA损伤反应激酶也会诱导中心体聚集，进而导致高风险的耐药和肿瘤复发。我们的结果提供了关于肿瘤如何通过激活中心体聚集获得高风险复发和治疗耐药性的见解，并揭示阻断KIFC 1磷酸化可能是降低肿瘤转移和复发风险的一种有希望的治疗策略。