抗体基因的克隆及重组

抗体基因的克隆及重组  

进行基因工程抗体制备的首要任务是获得能表达抗体肽链的基因片段。C区基因的序列比较恒定，可以很容易地获得，关键是准确地获得编码抗体可变区(特别是抗原结合位点区)的基因。目前可能从分泌特异性抗体的杂交瘤株的cDNA文库和基因组文库中进行筛选。正常情况下V区基因不表达，只有经过重排使VJ相连接后的基因才可以表达出具有抗原结合能力的Fv段。因此，人们勿需事先弄清V区的氨基酸排列顺序，只需使用J链基因(该基因的核苷酸序列变异小，可用于共用探针)探针即可从构建的cDNA文库中筛选出含V区基因外显子的基因克隆。遗憾的是，杂交瘤细胞系经常会有一些异常重排的V区基因，其中的部分还可以具有转录活性。因此为获得正确的目的基因，还有必要进一步的鉴定。利用基因组文库的优点在于所获得的V区基因含有完整的转录单位，包括自身的起动子、增强子成分及剪接功能，有助于重组后的顺利高效表达。而利用cDNA文库时(由于不含较长的内含子序列)，可通过PCR技术合成较多的V区基因，较容易获得目的基因。

Ig的V基因和C基因均由不同的外显子构成，抗体的每个功能区蛋白均由独自的外显子编码，这给体外加工和重组抗体基因组V和C区的基因带来了便利，可较容易地进行缺失(dalating)、插入(inserting)、交换(exchanging)及改变外显子的次序。