BAS-酶联免疫吸附试验

BAS-酶联免疫吸附试验

BAS-酶联免疫吸附试验(BAS-ELISA)是ELISA的一种改良技术，将BAS，即生物素-亲和素系统(biotinavidin system)引入ELISA，大大提高了ELISA的灵敏度。

(一) 亲和素和生物素

1. 亲和素(avidin) 给动物饲喂大量卵白蛋白后，可引起生物素缺乏症，此后证明，卵白蛋白中存在一种对生物素有异常亲和力的碱性蛋白，称之为抗生物素蛋白或卵白素，现今均称为亲和素。因为亲和素存在于卵白蛋白中，故可从鸡蛋白清中提取亲和素，它是由四个相同的亚基组成的碱性糖蛋白，分子量6.6～6.8万，等电点为10.5，由于每个亚基都可以结合一个生物素分子，所以亲和素呈四价反应性，在血清学反应中，可以产生新的放大作用；现规定凡结合1μg生物素所需亲和素的量，即为亲和素的一个活性单位，1mg纯亲和素约含13～15个活性单位。

2. 生物素(biotin) 即维生素H，主要存在于卵黄、肾、肝等组织中，除可提取外，也能人工合成，另外在动植物体内也广泛存在，系结构简单的小分子物质，分子量244.31，它不能直接与亲和素结合，需活化后，产生生物素衍生物(即生物素酰羟基丁二酰亚胺，BNHS，为白色结晶，熔点200～202℃)才能与亲和素结合。另外，它还能高比度地偶联抗体等反应物质和酶等标记材料，分别制成生物素化抗体和生物素化酶等，在免疫反应中起到一级稳定的放大作用。

因为亲和素对生物素有极强的特异性结合作用，且具有多价性，据此，可以建立生物素化抗体-亲和素-生物素化酶复合物酶联免疫吸附试验检测体系，利用亲和素为中介，一端通过生物素化抗体联接检测抗原的免疫反应系统，另一端通过生物素化酶等连接标记显示系统，可产生多极放大作用，从而明显地提高了检测的特异性和敏感性。

(二) BAS-ELISA的技术类型 该检测系统可分为以下两类：

1. BAB法 (biotin-avidin-biotin) 即以游离的亲和素分别桥联生物素化抗体和生物素

化酶的检测方法。目前最常用的是本法的改良法，即预先使亲和素与生物素化酶形成复合物(avidin-biotin-peroxidase complex, ABC)，再使其与生物素化抗体反应，因而叫做ABC法，此法既减少了反应步骤，又因ABC网格结构可网络数量极为可观的酶分子，从而使BAS的灵敏度又得到了进一步的提高。

2. BA法 (Ab-biotin-avidin-HRP)即直接以酶标亲和素联接生物素化抗体，检测抗原的方法。

为简化反应程序，厂家试制了酶联BAS试剂，连接被检测的免疫反应系统是生物素化抗体，即生物素化抗抗体-羊抗兔(SARG-b)和兔抗小鼠(RAMG-b)及一种生物素化抗体-生物素化马抗人AFp。较常用的生物素化酶是生物素化辣根过氧化物酶(b-HRP)。

(三) BAS-ELISA在检测工作中的应用 该技术应用最多的一个方面是检测可溶性抗原如细菌和病毒等，以及它们的相应抗体，现举例如下：

1. 细菌性抗原的检测 Yolken等采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测流感杆菌b型、肺炎球菌和链球菌抗原等，先用相应抗体包被酶标板，然后分别加入细菌培养上清液、生物素化抗体和亲和素与生物素化酶复合物来实施反应；本法检测的灵敏度比常规ELISA和荧光抗体法高4～16倍。

2. 病毒性抗原的检测病毒性抗原也可用双抗体夹心法检测，如检出粪便中的轮状病毒，可用抗体包板，再相继加入待检标本、生物素化抗体、亲和素和3H标记的生物素，然后作放射免疫测定。国内已用此法检测单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、肺炎病毒及其相应抗体。