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淋巴细胞类型鉴定技术

发表时间:2019-08-07 15:45作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

淋巴细胞类型鉴定技术


淋巴细胞类型鉴定技术

体外检测淋巴细胞,首先需制备外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),包括了淋巴细胞和单核细胞,常用的方法是葡聚糖泛影葡胺(又称淋巴细胞分离液)密度梯度离心法。用该法可去除红细胞、粒细胞等成分,即为PBMC,分离纯度可达95%。若需进一步纯化其中的淋巴细胞,可将PBMC铺于培养皿上,由于单核细胞易吸附玻璃,而留于平皿上,收集未吸附的细胞,即为富含淋巴细胞的悬液。若要分离T细胞,可用多种方法,如尼龙毛分离,抗CD3单克隆抗体,也有利用T细胞表面的CD2能结合绵羊红细胞(SRBC),使其形成花结(E-花结试验),比重增大,用密度梯度离心法将其与其他细胞分离。若要分离B细胞,可利用B细胞、单核细胞等能吸附尼龙毛的特性,将PBMC通过尼龙毛柱,B细胞吸附于柱上,T细胞被洗脱分离。如应用以下方法,通过检测淋巴细胞的某些表面标志,又可鉴定出淋巴细胞的类型及比例。

(一) 流式细胞术(flow cytometry) 是借助流式细胞仪(flow cytometer,FCM)对免疫细胞及其他细胞进行快速准确鉴定和分类的技术。流式细胞仪集光学、流体力学、电子学和计算机技术于一体,对细胞作多参数定量测定和综合分析,包括细胞大小、核型、表面分子种类等。样品经多种荧光素标记的抗体染色,因荧光素吸收与发射光谱的波长不同,信号能同时被吸收,因而能同时分析细胞表面多个分子的表达及表达程度。可检测T细胞、B细胞、NK细胞、单核巨噬细胞、树突状细胞等及其比率,CD4+/CD8+T细胞比值,以及白血病、淋巴瘤的免疫学分类。此外,可借光电效应,微滴通过电场时出现不同偏向,因此可分类收集所需的细胞。该技术能以每秒约5 000个细胞的速度无菌收集细胞,一般一次分选纯度在95%~98%,而且保持细胞活性,可进一步研究使用。

(二) 磁珠分离法   将已知抗细胞表面标记的抗体交联于称为微珠(平均直径小于1.5μm)的磁性颗粒,与细胞悬液反应后,微珠借抗体结合于相应细胞群或亚群的表面。再将细胞悬液加于一柱内,并置磁场中,因微珠被磁场吸收,将磁珠结合的细胞与磁珠非结合的细胞分开。如利用抗CD4交联的微珠可将T细胞中的CD4+T细胞与CD8+T细胞分开,从而获得高纯度的CD4+T细胞。

综上所述,可以看出免疫学技术有很大的优越性,可以直接从某些标本中检出微生物,也就是说应用制备的各种状态的抗体测定微生物性抗原,其敏感性可达几十个微克的水平。分析微生物学及分子遗传学检测技术则试图在传统的形态、培养及生化学试验的基础上,寻求更快速、简便而特异的新方法,但这些新方法大多仍不能脱离增菌培养的步骤,因为病原菌在病料标本中的数量有限,要适应各种分析方法的要求,在通常情况下,还必须进行培养,才能达到检测分析的目的。总之,由于新技术与电子计算机相结合,大大提高了反应的准确性、敏感性和快速性,常规检验的时间须以天来计算,而新的快速检验技术则缩短到以“时”计算,最快的在一小时内即可报告结果,其准确性与常规法的相符率可达90%以上。


文章分类: 试剂盒技术资料
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