修饰类型 | 修饰名称 | 特点及应用 |
氨基修饰 | 内部氨基修饰 | 主要用C6-dT aminolinker来加到胸腺嘧啶残基上来进行内部修饰。修饰后氨基与主链相距10个原子距离,可用于进一步的标记和酶连接(如碱性磷酸酶),目前提供内部氨基修饰介导的dT-Dabcyl、dT-Biotin和dT-Digoxingenin 修饰。 |
5'氨基修饰 | 可用于制备功能化的寡核苷酸,广泛应用在DNA芯片(DNA Microarray)和多重标记诊断系统。目前提供5’ C6 氨基修饰和5’C12氨基修饰两种,前者可用于连接一些即便靠近寡核苷酸也不会影响其功能的化合物,后者用于亲和纯化基团的连接和一些荧光标记,尤其是当荧光可能会因标记太靠近DNA链而被淬灭时。 | |
3'氨基修饰 | 目前提供C6 氨基修饰。它可用于设计新的诊断探针和反义核苷酸,例如5’端可用高度敏感的32P或荧光素标记的同时3'可用氨基修饰以进行其他的连接。此外,修饰可以抑制外切酶酶解,从而可用于反义实验。 | |
巯基修饰 | 5’-巯基(Thiol)在很多方面与氨基修饰类似。巯基可用于加附各种修饰如荧光标记物和生物素。例如可以在碘乙酸和马来酰亚胺衍生物存在下来制作巯基连接的荧光探针。5’的巯基修饰主要用5’巯基修饰单体(5’-Thiol-Modifier C6-CE Phosphoramidite 或Thiol-Modifier C6 S-S CE Phosphoramidite)。用5’-Thiol-Modifier C6-CE单体修饰后必须进行硝酸银氧化以去除保护基(trityl),而Thiol-Modifier C6 S-S CE单体修饰后须用DTT将二硫键还原成巯基。 | |
磷酸化 | 5’磷酸化(Phosphorylation)可用于接头、克隆和基因构建以及连接酶催化的连接反应。磷酸化可抗外切酶消化的相关实验中,也用于阻止DNA聚合酶催化的DNA链延伸反应。 | |
地高辛 | 地高辛(Digoxigenin)是一种从毛地黄植物分离出来的类固醇物质,因为毛地黄植物的花和叶子是这种物质唯一自然来源,所以抗地高辛抗体不会结合到其他生物物质。地高辛经由一个11个原子的间臂连接到脲嘧啶的C5位置。杂交的地高辛探针可以由抗地高辛抗体来检测,这个抗体一般会与碱性磷酸酶,过氧化物酶,荧光素或胶体金偶连。或者没有偶连的抗地高辛抗体但偶连的抗体。地高辛标记的探针可用于各种杂交反应,如DNA-DNA杂交(Southern blotting),DNA-RNA杂交(Northern blotting)斑点杂交(Dot blotting ),克隆杂交,原位杂交以及酶联免疫分析(ELISA)。 | |
生物素 | 生物素(Biotin)修饰的寡核苷酸能紧紧的结合在链霉亲和素蛋白上,链霉亲和素蛋白可以标记上荧光染料和酶或是附着的中间结合物附着在固体物生物表面,不同的分子生物学和纯化方法都包含生物素修饰。生物素修饰可以利用C6或是TEG间臂被添加在寡核苷酸的5’ 或 末端,生物素TEG需要纯化,中间的生物素修饰可以通过dT碱基加入,这种形式需要更多的纯化步骤。引物生物素标记,可用于非放射性免疫分析来检测蛋白质、胞内化学染色、细胞分离、核酸分离、杂交检测特异性的DNA/RNA序列、离子通道构象变化等。 |
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