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GST融合蛋白纯化方法

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发表时间:2018-10-19 15:34作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

GST融合蛋白纯化方法


  1  目的片段接入pGEX载体;

  2 涂板,挑单克隆,摇菌至OD600≈1.0,加入IPTG(终浓度1 mM)诱导6-8 h;

  3 收菌,每升菌液约以50 mL PBS重悬,加入1%Triton X-100(v/v),1%β-巯基乙醇(v/v),PMSF(终浓度1 mM);


  以下步骤均在冰上操作:


  4 超声破碎菌体,15000 g,10min离心取上清,在上清中加入适量GST-beads,轻轻晃动令其吸附蛋白1 h;

  5 2000 g,3min离心弃上清;

  6 加入至少10倍体积PBS,轻摇至beads悬浮于溶液中,2000 g,3 min离心弃上清;

  7 重复步骤6 两次;

  8 加入1 mL GST Elution Buffer,轻摇10 min;

  9 2000 g,3 min离心,收集上清;

  10 重复步骤8-9至少两次;

  11 SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度,Bradford法检测蛋白浓度;

  12 将蛋白置于-20℃保存。


文章分类: 蛋白技术资料
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