DOCA-盐高血压导致的假黄瘤弹性小鼠模型中心血管钙化和纤维化的证据
这种Elasticum (PXE)是一种罕见的疾病,其特征是分裂和进步钙化结缔组织的弹性纤维。 虽然动脉高血压(出去)一直在报道PXE病人,对病理表现的影响还未开发。 我们研究了实验上出去的后果Abcc6−−PXE小鼠模型。 实验诱导了出去去氧皮质酮乙酸酯(DOCA-salt) uni-nephrectomised老鼠。 血压(BP)和血管反应性分别使用tail-cuff体积描记法和myography监控。 钙含量和纤维化评估使用比色法,分别冯Kossa和小天狼星红染色。 基因表达与血管生物学测量使用定量聚合酶链反应。 BP在DOCA-salt诱导一个匹配的上升Abcc6−−和WT老鼠。 主动脉瓣环收缩和放松在体外是类似的。 钙积累在高血压的心Abcc6−−/小鼠显著纤维化心肌和主动脉与WT老鼠相比之下。 在高血压Abcc6−−/小鼠主动脉,这些结果证实了基因表达模式有利于钙化、纤维化和细胞外基质重塑。Abcc6丧失与更大的心血管钙化和纤维化小鼠受到DOCA-Salt高血压。 这些结果表明可能PXE出去患者心血管疾病恶化,迫使勤奋BP监控。
这种Elasticum (PXE, 264800年人类)是一种遗传性疾病,其特征是分裂和进步的弹性纤维钙化皮肤,眼睛和血管1。 最常见的症状有血管外周动脉疾病(PAD)和脑梗塞的风险增加1。 PXE是由突变引起的ABCC6基因编码产生一个跨膜三磷酸腺苷(ATP)绑定磁带(ABC)转运蛋白主要表达在肝脏和肾脏2,3.。 几项研究已经表明,正常组织暴露于PXE病人血清/血浆往往钙化,表明代谢与不存在的潜在病因这种疾病一致或低级ABCC6转运蛋白表达在受影响的组织4。 没有ABCC6内源性底物还一直强调识别,导致异位钙化5,6。
典型的PXE表现包括黄色丘疹的脖子和大皮肤褶皱,视网膜angioid条纹和心血管并发症(简历)7如:周围血管脉动降低或缺乏; 不明原因的高血压; 回声的透明由于动脉钙化(尤其是在肾脏、脾脏和胰腺); 出去; 心绞痛; 间歇性跛行(通常被认为是第一部加速动脉粥样硬化的迹象); 胃肠出血; 动脉硬化; 和增加心肌和脑梗塞的风险7。 有一个PXE患者的血管事件风险高于一般人群,可能造成动脉内侧钙化动脉硬化和增厚8。 不良动脉重塑和增加主动脉僵硬与耐药出去一般人群相关联9。 约20 - 25%的PXE患者心血管并发症相关的高发病率和死亡率,如更高的加速动脉粥样硬化患病率涉及更大的完整的血管阻塞的风险10,11。
自Abcc6−−/小鼠模型模拟人类PXE的多数表现,他们使用PXE研究是十分必要的12。 在目前的研究中,/ Abcc6−−醋酸和WT老鼠提交去氧皮质酮(DOCA) -salt-induced出去,代表一个实验模型的特点是一个初始上升在出去前几天后跟BP数周持续升高13。 我们的目的是调查的后果DOCA-salt-induced出去的简历反应和改造Abcc6−−老鼠与WT老鼠相比。
没有区别之间能找到休息的血流动力学参数Abcc6−−和WT老鼠(表1)。 DOCA-salt治疗引起收缩压(SBP)不断攀升,在一段时间内的19天Abcc6−−和WT老鼠(图。1)。 在治疗结束,SBP为141.4±5.5毫米汞柱Abcc6−−/ DOCA vs 109.7±5.1毫米汞柱Abcc6−−小鼠(p < 0.01)和153.4±8 8 mmHg WT DOCA vs 117±3.7 mmHg WT小鼠(p < 0.01)。 在SBP没有区别Abcc6−−和WT老鼠。 血管收缩和endothelium-dependent和独立使用myography放松测量主动脉环。 对氯化钾收缩反应影响DOCA-salt和相当鼠标菌株(图。2)。 收缩反应5 -羟色胺(5 -)在增加Abcc6−−和WT DOCA标本没有显著的基因型效应(图的证据。2 b)。 同样,pre收缩对苯肾上腺素(1之前µM Ach)根据基因型(相当于紧张局势。内格罗蓬特:8.1±4.6 vs 5.4±3.4 WT未经治疗Abcc6−−; 11.6±1.9 vs 11.1±4.3 DOCA WT vsAbcc6−−),一个重要的发现获得相关的收缩DOCA治疗(p = 0.007,数据未显示)。 Endothelium-dependent(乙酰胆碱,乙酰胆碱)和独立(硝普酸钠,SNP)放松没有被DOCA-salt和相当鼠标菌株(无花果。2 c, D).
可比DOCA-salt-induced血流动力学参数的变化Abcc6−−和WT老鼠。 收缩压动力学特征以及平均值在终极五天的DOCA-salt治疗。 数据代表的意思是±SEM六老鼠每组* * * p < 0.05, p < 0.01 WT治疗与DOCA;#p < 0.05,# #p < 0.01Abcc6−−/未经处理而DOCA。
可比DOCA-salt-induced血管反应性的变化Abcc6−−和WT老鼠。 (一个)主动脉瓣环的收缩反应氯化钾,(B)在5和剂量反应曲线收缩(C,D)endothelium-dependent和独立放松(分别空调采暖和SNP)评估使用电线myography。 数据代表的意思是±SEM六老鼠每组* * * p < 0.05, p < 0.01 WT治疗与DOCA;#p < 0.05,# #p < 0.01Abcc6−−/未经处理而DOCA。
心脏重量胫骨长度(HW / TL)比测量来评估心脏肥大,揭示未经处理的WT和没有区别Abcc6−−老鼠。 DOCA-salt治疗诱导显著增加HW / TL比率在WT (88±8 127±8; p < 0.01),但不是Abcc6(图/−−老鼠。3).
DOCA-salt-induced心脏重塑Abcc6−−老鼠:肥大、钙积累和纤维化。 (一个)心脏重量规范化胫骨长度(HW / TL) (B)总额的比色测定左心室和组织钙水平(C)图像和代表(D)量化天狼星红染色。 数据代表的意思是±SEM六老鼠每组* * * p < 0.05, p < 0.01, * * * p < 0.001。
组织钙总量的比色定量显示更重要的积累在左心室(LV)Abcc6−−/ DOCA比Abcc6−−小鼠(p < 0.05)(图3 b),表明营养不良的心脏钙化(DCC)。 同类组织钙增加不是WT小鼠中发现。 分析了冯Kossa染色幻灯片都心中消极的LV小鼠模型的四个系列的标本(数据没有显示)。 就是心脏纤维化,天狼星红染色,发生在Abcc6−−/ DOCA但不是Abcc6−−老鼠。 这不是在WT DOCA与WT老鼠(图。3 c, D)。 心脏肥大之间没有显著相关性(HW / TL)和纤维化评分WT DOCA老鼠和证明Abcc6−−/ DOCA老鼠(数据未显示)。
主动脉改造出现高血压和壁厚的测量在这些动物。 重要的血管肥大在WT而不是被发现Abcc6−−/ DOCA-treated老鼠(82.7±2.4 vs 75.2±5.6µmµm; 相比,p < 0.05)和未经处理的WTAbcc6−−老鼠(60.7±2µm vs 67.5±3.1µm; p > 0.05)(图4)。 冯Kossa染色在整个TA -幻灯片(图分析。4 b)。 纤维化明显更广泛Abcc6−−/ DOCA老鼠比Abcc6−−老鼠。 没有记录在WT DOCA积极天狼星红染色(图4 c, D)。 胸主动脉之间没有显著相关性(TA)肥大和纤维化的分数可以证明无论是在WT DOCA也在Abcc6−−/ DOCA老鼠(数据未显示)。
DOCA-salt-induced主动脉纤维化除了肥大Abcc6−−老鼠。 (一个)助教各部分壁厚测量。 (B)代表冯Kossa染色进行TA的图像部分。 (C)图像和代表(D)量化天狼星红染色进行TA部分。 数据代表的意思是±SEM六老鼠每组* * * * * p < 0.01, p < 0.001。
我们评估表达式基因编码的蛋白质参与纤维化(无花果。5),异位钙化(无花果。5 b)和矩阵改造(无花果。5度在助教)。 基因表达水平无统计学差异被发现之间的治疗Abcc6−−和WT老鼠。 的基因参与纤维化的过程,显著增加胶原蛋白1和3 (Col1a1和Col3a1),Tgfβ2表达只在被发现Abcc6−−/ DOCA老鼠而显著增加结缔组织生长因子(Ctgf)表达式被发现只在WT DOCA老鼠(图。5)。 基因异位矿化中,转录因子Sp7表达减少,骨桥蛋白(Spp1)和矩阵杯子蛋白(Mgp)表达增加Abcc6−−/ DOCA和WT DOCA老鼠与未经处理的相比Abcc6−−和WT老鼠。 有趣的是,pro-mineralizing骨形成蛋白4 (Bmp4)和periostin (Postn)基因表达显著增加Abcc6−−/ DOCA而未经处理的Abcc6−−/而不是WT DOCA老鼠,达到统计学意义受到基因型(图。5 b)。 最后,在矩阵改造,所涉及的基因表达的金属蛋白酶组织抑制剂1 (Timp1)高而基质金属蛋白酶9 (Mmp9)在这两方面都较低Abcc6−−/ DOCA和WT DOCA比未经处理的小鼠主动脉Abcc6−−和WT老鼠。 基质金属蛋白酶2 (Mmp2)、纤溶酶原激活物尿激酶(Plau)和纤溶酶原激活物inhibitor-1 (Serpine1表达显著增加Abcc6−−/ DOCA老鼠。 除了Timp2和平台记录在案的显著差异基因型(图。5度).
高血压血管重塑的分子模式Abcc6−−和WT老鼠。 基因编码的蛋白质参与(一个纤维化,B)异位钙化和(CRT-qPCR)矩阵改造评估的助教。 数据代表褶皱变化与未经处理的±SEM从4到6个老鼠每组(t)。 * * * p < 0.05, p < 0.01未经处理而DOCA。#p < 0.05,# #p < 0.01 WT DOCA vsAbcc6−−/ DOCA。
在目前的研究中,我们证明DOCA-salt-induced出去产生深刻的简历改造Abcc6−−/老鼠与(i)钙沉积在心脏DCC的特点; (2)心肌纤维化; (3)广泛的血管纤维化和(iv)血管基因表达参与钙化和纤维化。
这个简历改造以来高血压不能完全解释DOCA-salt治疗后,Abcc6−−/老鼠开发相同的动能和血压上升幅度(和其他血流动力学参数)作为WT老鼠。 这表明PXE患者可能产生出去一般人群,尤其是salt-rich饮食条件14。
尽管英国石油公司类似的获得,只有高血压Abcc6−−/小鼠心肌钙化。 进步的异位钙化是人类和小鼠PXE的标志2,15。 在鼠标,这样的表型是显示慢性老年性鼻毛钙化16或钙沉积后急性心肌损伤,对应DCC表现型。 DCC结果从当地组织损伤和细胞坏死,发生在心肌梗塞组织愈合17。 据我们所知,还没有证据表明心肌钙化后持续血流动力学的变化Abcc6−−老鼠或PXE的病人。 这些发现表明,超载对心脏的压力增加外周动脉阻力可能构成压力,有助于引起营养不良的钙化。 尽管人类PXE DCC尚未报道18的倾向,这种表型可能预测软组织钙化当提交机械应变19。 钙沉积这一事实并没有发现冯·Kossa染色方法在病人皮肤活检的诊断通常使用PXE,也可能被解释成片状矿物沉积模式的LVAbcc6−−/ DOCA老鼠,因为之前报道的助教Abcc6−−/老鼠20.。
在平行于钙化,高血压Abcc6−−/老鼠心脏纤维化发展显著。
很少有数据在PXE简历纤维化的发生率。 劳等。 提出了Abcc6作为一个候选基因的应激心肌纤维化21。 此外,有等。 证明大xylosyltransferase 1(纤维化的一个标志)活动PXE患者的血清22。 DOCA-salt模型产生代表的简历改造人类volume-overload-induced出去,涉及血管炎症、肥大、内皮功能障碍和纤维化13据报道,尽管DOCA-salt模型引起心脏功能障碍,舒张压(菲律宾)障碍23,我们观察到没有差的影响Abcc6−−/基因型在菲律宾或心率(HR)。 没有心脏功能反响可能是由于缺乏敏感性的方法(tail-cuff体积描记法)。 也不排除在后期调查高血压会给出不同的结果导致心肌功能障碍的长期在这个模型之前报道23。 值得注意的是,缺Abcc6减轻心脏肥大,一般是BP升高。 这与我们之前的研究证明,老了Abcc6−−/老鼠发达自发心脏肥大,但没有纤维化24。 这些数据表明,心脏的病理改造Abcc6缺陷在不同上下文中的老化和高血压。
值得注意的是,我们发现增加LV和TA的纤维化Abcc6−−老鼠DOCA-salt对待。 血管纤维化与增加fibrosis-related基因有关Col3a1,Col1a1,Mmp2,Tgfβ2,Serpine1,Plau和Postn在主动脉壁25,26。 在人类PXE成纤维细胞,upregulationTGFβ2据报道27尽管这种失调的确切性质还不清楚26。 MMP2和MMP9在PXE被认为扮演一个角色,由于证据PXE患者的血清水平的增加28。 从细胞的角度来看,只能在PXE-fibroblasts MMP2的微分表达式29,30.。 在目前的研究中,我们发现高水平的Mmp2和Timp1表达式的助教Abcc6−−/ DOCA而未经处理的Abcc6−−老鼠,可能表明在高血压持续的ECM重塑和胶原蛋白增加营业额Abcc6−−/老鼠29。 Serpine1,也称为PAI-1(纤溶酶原激活物inhibitor-1),是主要的组织纤溶酶原激活物抑制剂(平台)和尿激酶纤溶酶原激活物(PLAU),和作为纤维蛋白溶解剂31。 PLAU活动,将纤溶酶原血纤维蛋白溶酶,物是直接由Serpine1本身控制调制TGFβ家庭成员和各年龄相关性疾病,导致PLAU失调证明受损组织再生、炎症和纤维化32。 我们的研究结果,揭示了更高水平的Serpine1和Plau表达在高血压的助教Abcc6−−暗示一个加剧了纤维化的过程Abcc6−−/ DOCA老鼠。 Periostin (Postn)是一个ECM主要由成纤维细胞和蛋白质表达起着关键的作用在心肌梗死后心脏肥大和纤维化33。 我们测量的表达式Postn助教的Abcc6−−/ DOCA与未经处理的小鼠相比,唤起先前描述Postn和纤维化反应之间的联系34。 增加胶原蛋白类型我在I / III型胶原合成和比率在血管平滑肌细胞导致刚度矩阵35。 在目前的研究中,我们发现高水平的Col1a1, Col3a1表达式的助教Abcc6−−/ DOCA老鼠提出一些改造与纤维化和可能潜在的动脉ECM加劲。
Abcc6不足的另一个后果可以证明血管重塑pro-calcifying基因表达模式在高血压的助教Abcc6−−老鼠。 有越来越多的证据表明,参与TGFβ总科信号通路(主要是TGFβ和bmp)和无机焦磷酸PXE (PPi)26实现协同,这可能导致异位钙化。 它已经表明,BMP信号通路被激活的心脏和主动脉Abcc6−−/老鼠36。 蛋白质Bmp4,参与血管平滑肌细胞钙化36,风险高Abcc6比WT /−−高血压老鼠老鼠。 有趣的是,Bmp4可能会帮助DCC后缺血再灌注损伤Abcc6−−/老鼠36。 我们还可以减少碱性磷酸酶(高山)和增加ectonucleotidase (Enpp1)表达在WT DOCA老鼠,都有利于减少π/ PPi比预防血管钙化37,38。 这些变化被废除Abcc6−−老鼠,表明缺乏anti-mineralization机制在这些动物。 总之,这些研究结果突出血管钙化的倾向Abcc6−−老鼠DOCA-salt对待。 内侧动脉钙化血管老化的一个特点39。 我们的结果表明,在高血压血管钙化Abcc6−−/老鼠模仿观察到老Abcc6−−/老鼠20.。 高血压加速老年性血管重塑和功能障碍40。 老化可能会影响在高血压血管损伤的严重程度40。 因此,密切相互作用生物衰老和很高的英国石油公司可能存在的影响40。 这种特定的改造途径的相关性还有待验证人类PXE的病人。
我们可以假设这种改造可能会导致长期的心脏和血管功能的恶化Abcc6−−老鼠和PXE患者的可能。 这种假设可能证实在小鼠和人类。 心脏的功能Abcc6−−/老鼠之前由我们小组来评估。 除了轻微的心脏肥大最古老pre-senescent动物,没有重大异常可以证明Abcc6−−/老鼠24。 然而,在病理条件下的情况可能会有所不同。 不直观,DOCA-salt-induced肥厚性重塑是有限的在LV和主动脉Abcc6−−老鼠。 之间没有显著相关性心脏或助教肥大和纤维化的分数可以证明没有Abcc6−−/或WT老鼠DOCA(没有显示)。 虽然投机,结论可能是早期纤维化或钙化会钝肥厚性过程。
内侧胸主动脉血管功能的调查显示,尽管上涨对5 -羟色胺和去甲肾上腺素收缩反应,DOCA-salt治疗不影响内皮功能无论是在WT也在Abcc6−−老鼠。 然而,我们不能排除阻力动脉的内皮功能障碍是评估高血压DOCA-salt老鼠,因为它之前已经报道过了41。 这样明显的差异与我们的研究结果可能会导致电阻之间的区别和遵从性血管DOCA-salt方案的上下文中41。
在我们先前的研究耐药和电导WT和动脉Abcc6−−老鼠,没有发现差异在内皮依赖和独立的放松以及去甲肾上腺素和血栓素analogue-dependent收缩20.。 在这里,在病理条件下,血管Abcc6缺陷还没有显示功能的影响。 这可能是解释这一事实片段用于血管反应性(内侧胸主动脉)是不同于那些用于组织学分析更近端(毗邻主动脉弓)和容易纤维化或钙化20.。 同时,组织学纤维化使用小天狼星红是半定量的量化。 虽然染色证实了分子生物学方法很难评估肝纤维化的程度及其功能的影响。 没有在高血压内皮功能障碍Abcc6−−/老鼠可能不过表明PXE-associated垫与其他钙化的代谢性疾病,如糖尿病、慢性肾功能不全和动脉粥样硬化,导致内皮功能障碍的早期发病42。 据我们所知,没有内皮功能障碍的发生率或血流介导扩张一直在报道PXE的病人。 参照收缩反应,我们的结果与先前的数据显示,损失的连贯Abcc6对receptor-dependent动脉收缩的影响有限,而这是与增加肌原性的语气吗20.。
据我们所知,没有数据报告简历的改造Abcc6−−老鼠。 广泛纤维化和恶化的钙化没有预期,提高了抗高血压药的治疗潜力的问题。 不同的治疗肾素血管紧张素系统的目标或内皮素受体43,44,45已被证明有说服力地减少心脏纤维化DOCA-salt模型在不影响BP升高而降低BP与肼苯哒嗪等阻滞交感神经的然而不完整对纤维化的影响46之间的分离,证明疗效的药物治疗,防止肝纤维化、生硬的基点。 从我们的研究结果,我们可以假定钙化和心肌纤维化DOCA-salt老鼠可以独立在高血压。 基于上面引用的研究中,这将是有趣的抗高血压治疗是否会工作有效地减少纤维化Abcc6−−老鼠和这些疗法是否也可以改善钙化,这构成了这个模型的特异性。
事实上,在心力衰竭的典范21,Abcc6−−/老鼠患心脏纤维化和钙化的显示后心肌梗死或坏死的心脏病变47。 然而,在这些研究心脏功能不调查。 因此,这个简历的功能反响改造仍然质疑,在这些病理情况以及高血压。 在人类PXE病人,Campens等。 报道心脏和血管功能障碍包括增加脉搏波速度和左心室舒张功能改变11。 第一个最有可能揭示了动脉硬化由于过度钙沉积在动脉壁之前报道Abcc6−−/老鼠20.和PXE病人8,11,20.。 我们相信,第二个可能与结构(纤维化或钙化)心肌的改变。
血管硬度报告Abcc6−−/20.老鼠和PXE病人8,11。 心血管重塑PXE是一个重要的问题,尤其是在常见的病理状态如高血压。 我们认为石灰质的纤维化改造我们的证据可能产生长期的简历功能障碍同意PXE患者的临床特征。 调查高血压的心脏功能Abcc6−−/老鼠以及降压的潜在保护作用的分子会值得特别关注。
的数据支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。 相应的作者有完全访问所有数据研究中,负责其完整性和数据分析。 手稿的作者写了初稿,和所有的合作者参与后续修改和批准。
调查是按照指南进行的欧盟指令2010/63 /欧洲议会的保护动物用于科学目的(授权实验室849007003)。 协议是机构批准的动物保健和使用委员会(IACUC):动物实验的伦理委员会(CEAA)“支付de la卢瓦尔河”(允许CEEA。 Pdl n°06, APAFIS # 4570 - 20 - l6031716512454 v3的“Ministere de l 'Education国家,de l 'Enseignement特级et de la矫揉造作的”)。Abcc6−−/缺陷小鼠(Abcc6tm1Aabb以下简称为Abcc6−−老鼠)生成如前所述12。 老鼠backcrossed C57BL / 6 J背景超过10倍,并使用杂合的饲养者繁殖了。 成年雄性小鼠年龄在23岁到50周被用来避免老年性动脉硬化引起的偏差。
Abcc6−−和WT老鼠单方面nephrectomised下异氟烷吸入异氟烷麻醉(2.2 -2.6% 100% O2)。 Hind-paw撤军,瞬目反射和呼吸速率在这些老鼠监控。 1.5厘米的切口是通过皮肤胸腔和腹部肌肉尾。 肾动脉和静脉结扎与4 - 0的针脚缝合(Ethicon)和左肾切除手术。 皮肤和肌肉层分别与4 - 0的针脚缝合休市。 此外,1厘米的切口是在后面,底部的颈部植入DOCA丸皮下注射(美国创新研究,萨拉索塔,佛罗里达州,美国),提供一个剂量的1毫克/公斤/天。 老鼠然后管理水含有0.9%氯化钾氯化钠和0.2%。 在复苏,他们每天监控19天测量SBP和人力资源使用类似tail-cuff体积描记法48。
老鼠牺牲在DOCA颗粒植入后19天。 后立即安乐死,TA动脉解剖在冰冷的生理盐水(PSS:更易/ 130.0 L,氯化钠; 15.0,NaHCO3; 3.7、氯化钾; 1.6、氯化钙; 1.2、MgSO4和11.0、葡萄糖)。 药理进行了调查在2 mm长的动脉段安装在wire-myograph (DMT,奥尔胡斯,DK)。 初始收缩氯化钾(氯化钾80毫米)和累积浓度收缩反应5 -羟色胺(5 -)是在休息的动脉进行测试。 Endothelium-dependent和独立放松测量使用空调采暖和一氧化氮供体(SNP),分别。 放松反应,以累积量效曲线,建立了在phenylephrine-contracted(1μM)动脉。
钙量化LV的心决定使用比色分析49。 每个鼠LV的一半重、干和孵化在室温下48小时在0.15 N盐酸。 这些样本被离心机在15000×g,和总钙含量的浮在表面的计算使用钙Liquicolor测试套件(Stanbio Boerne, TX)。 结果规范化组织重量和价值表现在毫克/克干组织。
剩下的一半的每个小鼠LV和助教组织嵌入在10月(最佳切削温度)化合物。 冯Kossa染色确定钙沉积和小天狼星红染色确定进行了I型和III胶原纤维μm-thick 5日冻结部分。 组织部分分析了在奥林巴斯AX70显微镜下观察(奥林巴斯、东京、日本)。 量化从五个不同的领域获得了红点的纤维领域的每个组织样本400 x放大(对应一个字段大小为0.344毫米2),使用Cell-F软件和ColorView三世相机(奥林巴斯、东京、日本)。 结果的平均值表示为五个不同的领域发现每个组织样本。 主动脉厚度测量5μm-thick冻结部分使用图像J软件(美国国立卫生研究院NIH)(三到六每个动物主动脉部分)。
基因表达研究使用定量聚合酶链反应总RNA逆转录后(RT-qPCR)。 段解剖TA储存在−20°C RNAlater稳定剂(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA),直到使用。 使用RNeasy RNA提取®微工具包(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA)按照制造商的说明书。 RNA提取这些主动脉(200 ng)被用来合成使用QuantiTect互补®反转录试剂盒(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA)。 与Sybr RT-qPCR执行®选择主混合(美国应用生物系统公司Inc .林肯,CA)试剂使用LightCycler 480实时PCR系统(美国新泽西州罗氏,Branchburg)。 引物序列补充表所示S1。Gapdh,产生Hprt Gusb被用作看家基因。 分析时没有进行Ct值超过35岁。 结果表示为:2(Ct target-Ct看家基因)。
结果表示为±SEM。 统计分析了使用GraphPad棱镜软件(La Jolla、钙、美国)。 各自的角色DOCA-salt治疗和基因型测试通过一个双向方差分析测试。 观察这两个因素之间的相互作用,在每个基因型DOCA-salt治疗的效果进行了研究使用Bonferroni因果检验。 双向重复测量的方差分析是用来分析高血压和体外药理研究。 血管基因表达数据比较使用学生的学习任务。 被认为具有统计显著性p值< 0.05。 基因表达,是对原始数据进行统计分析来评估(i)高血压的影响分别在这两种基因型(2)基因型控制的效果(non-hypertensive)小鼠和(iii)在高血压小鼠基因型的影响。 为了可读性结果显示为褶皱比未经处理的小鼠基因表达水平的变化。
目前的研究表明Abcc6丧失与简历钙化和纤维化后慢性出去(无花果。6)。 高血压会导致病态的恶性循环血管重塑包括厚度、刚度、纤维化、钙化和老化25,40。 因此简历老化可能是负责高剩余寿命风险发展中出去中年人和老年人50。 我们的研究结果表明加速在高血压病理简历改造Abcc6−−/老鼠导致心脏和肝纤维化、钙化主动脉动脉粥样硬化的独立,炎症和血栓形成PXE患者中发现51。 最后,目前的治疗方法减缓或者减少简历PXE的表现是基于减少心血管风险因素通过改变生活方式(戒烟、减肥,适度的体育锻炼)18。 没有具体建议PXE出去管理病人因为没有随机试验调查了这个问题。 而动脉厚度和刚度增加PXE的病人8不管BP和出去对厚度和刚度的影响50的重要性,我们的结果确定勤奋监测BP PXE患者,按照高血压治疗指南建议和心血管疾病的风险52。 选择BP药物应目标中心动脉压,防止主动脉厚度和刚度在导管动脉功能评价(咖啡馆)研究53。
研究表明一个证据的一般合成心血管钙化、纤维化这种Elasticum小鼠模型受到DOCA-Salt高血压。
本报告所描述的所有程序获得伦理委员会批准。
本研究旨在评估高血压和PXE之间的相互作用。 虽然简历PXE的钙化是一个标志,Abcc6缺陷允许广泛纤维化发生在老鼠受到DOCA-Salt高血压。 扰动在合成、基因的表达与组织和降解ECM跟激活成骨的信号的PXE老鼠。 未来的调查应该旨在描述心脏和血管的分子签名这种异常改造为了定位适当的治疗以防止hypertension-associated PXE心血管并发症。
|
|
