木聚酶活力测定
取15 ml具塞刻度试管按下面的反应顺序进行操作,在反应过程中,从加入底物(吸取前摇匀) (4.5)开始,向每支试管中加入试剂的时间间隔要绝对一致, 50℃水解10 min.
反应步骤及试剂、溶液用量见下表:
试样 空白
1.加底物(4.5)1.8ml 1.加底物(4.5)1.8ml
2.50℃预热3min 2.50℃预热3min
3.加酶液0.2ml 3. 50℃水解10 min
4.混合 4. 加DNS试剂3 ml
5.50℃水解10 min 5. 混合
6.加DNS试剂3 ml 6. 加酶液0.2 ml
7.混合 7.混合
8.沸水浴中10 min 8.沸水浴中10 min
9.冷却定容至15 ml 9.冷却定容至15 ml
10.空白调零540nm下测定 10.空白调零540nm下测定
7.酶活力单位计算
酶活力=(S×D×1000)/(0.2×10)×1.7 μg/ml(g).min
式中:
S—测得光吸收在标准曲线上对应的木糖量,mg数;
D—酶液或酶粉稀释倍数;
1000— mg和μg之间的换算系数;
0.2—测定所取酶液量,ml数;
10—反应时间,min数;
1.7—方法换算系数。
8. 酶活力单位定义及换算
8.1 本方法酶活定义:在本测定条件下,每分钟水解木聚糖产生1μg还原糖(以木糖计)所需酶量定义为一个酶活力单位(u)。
国际酶活单位的定义:在测定条件下,每分钟水解木聚糖产生1μmol还原糖(以木糖计)所需酶量定义为一个酶活力单位(IU)。
8.2 u与国际单位IU 的换算关系:
1 u=1÷150 IU(μmol糖/ml(g).min)
150: 木糖的分子量
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