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内切木聚糖酶活测定

发表时间:2019-06-05 15:53作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

木聚酶活力测定

取15 ml具塞刻度试管按下面的反应顺序进行操作,在反应过程中,从加入底物(吸取前摇匀) (4.5)开始,向每支试管中加入试剂的时间间隔要绝对一致, 50℃水解10 min.

反应步骤及试剂、溶液用量见下表:

试样                                      空白

1.加底物(4.5)1.8ml        1.加底物(4.5)1.8ml

2.50℃预热3min        2.50℃预热3min

3.加酶液0.2ml        3. 50℃水解10 min

4.混合        4. 加DNS试剂3 ml

5.50℃水解10 min        5. 混合

6.加DNS试剂3 ml        6. 加酶液0.2 ml

7.混合        7.混合

8.沸水浴中10 min        8.沸水浴中10 min

9.冷却定容至15 ml        9.冷却定容至15 ml

10.空白调零540nm下测定        10.空白调零540nm下测定


7.酶活力单位计算

酶活力=(S×D×1000)/(0.2×10)×1.7   μg/ml(g).min

式中:

S—测得光吸收在标准曲线上对应的木糖量,mg数;

D—酶液或酶粉稀释倍数;

1000— mg和μg之间的换算系数;

0.2—测定所取酶液量,ml数;

10—反应时间,min数;

1.7—方法换算系数。

8. 酶活力单位定义及换算

8.1 本方法酶活定义:在本测定条件下,每分钟水解木聚糖产生1μg还原糖(以木糖计)所需酶量定义为一个酶活力单位(u)。

国际酶活单位的定义:在测定条件下,每分钟水解木聚糖产生1μmol还原糖(以木糖计)所需酶量定义为一个酶活力单位(IU)。

8.2 u与国际单位IU 的换算关系:

1 u=1÷150 IU(μmol糖/ml(g).min)

150: 木糖的分子量


文章分类: 分子技术资料
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