免疫学技术

免疫学技术：

1、概念：根据免疫反应特异性的原理，建立的各种检测与分析技术以及建立这些技术的各种制备方法。

凡是与免疫有关的技术都可称为免疫学技术。

2、免疫反应：抗原与相应抗体在体内或体外都能发生特异性结合，并根据抗原和抗体的性质、反应条件和参与反应的因素等，表现为各种各样的反应，统称为免疫反应。

体内免疫反应：主要是排斥异物，维持机体的正常生理平衡。

体外免疫反应：用已知抗原检测抗体或用已知抗体检测抗原。

3、免疫学技术的类型： 血清学反应；细胞免疫技术； 免疫制备技术

（1）血清学反应：在体外进行的免疫反应，一般采用血清进行，所以也称为血清学反应或血清学试验。

（2）细胞免疫技术：是指与细胞免疫有关的各种检测技术，对免疫细胞和细胞因子进行检测。

（3）免疫制备技术：指制备与免疫检测有关制剂的技术。

抗原、抗体制备，抗体提纯（粗提，精提），抗体标记

需要免疫学知识及其他相关科学知识的结合才能完成。

二、血清学反应的类型

根据抗原抗体反应的性质、表现的现象及检测结果的条件区分为：

凝聚性反应（试验）

标记抗体技术（免疫荧光技术，免疫酶技术，放射免疫测定，发光免疫测定等）

有补体参与的反应

中和反应

三、血清学反应的一般特点（规律）

（一）、特异性与交叉性

抗原与抗体结合具有高度特异性，这是血清学试验的基础。

抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。

如破伤风抗毒素只能与破伤风毒素结合，抗猪瘟病毒抗体只能与猪瘟病毒结合。

当有共同抗原存在时，可发生交叉反应；

马流产沙门氏菌菌体抗原不仅能与抗马流产沙门氏菌血清结合，也能与抗绵羊流产沙门氏菌血清和抗鼠伤寒沙门氏菌血清结合，只不过是反应强度弱些。

（二）、抗原与抗体结合的原理

1、分子表面的结合

抗原与抗体的结合相当稳定，但却是表面的结合，而且是可逆的，二者仍可分开（60℃以上，pH3以下）。如将二者分开，抗原或抗体的性质不改变。

2、抗原与抗体按一定的分子比例结合

抗原分子一般有10-50个结合点（决定簇），有的甚至超过200个；而抗体分子仅有2-10个结合点。

当抗原与抗体比例最适合时，结合最充分，形成的复合物最多，反应最明显，结果出现的最快，此时称为等价带。

如抗原或抗体过剩，则抗原与抗体仅能形成小分子的复合物，不出现肉眼可见的反应，称为带现象。

抗体过剩称为前带现象，多见于凝集反应；抗原过剩，称为后带现象，多见于沉淀反应。

在用免疫学方法测定抗原时，应使反应系统中有足够的抗体量，否则测得的量会小于实际含量，甚至出现假阴性。

3、反应可分为两个阶段

特异性结合阶段，可见阶段，表现为凝集、沉淀等。

（三）、有高度的敏感性

具有高度的敏感性，不仅用于定量，还可检测极微量的抗原或抗体。

在测定血清中某一物质的含量时，化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml，免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。标记的免疫测定的敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平。例如，用放射免疫测定法或酶免疫测定法测定HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。

（四）、血清学反应受某些因素的影响

1、电解质：失去电荷，利于凝集或沉淀。

2、温度：一般是37℃

3、酸碱度

4、杂质异物

反应中如存在有与反应无关的蛋白质、类脂质、多糖等，往往会抑制反应进行，或引起非特异性反应。

四、血清学试验的应用

1、血清学检验

（1）传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病和变态反应疾病等；

对于传染病来说，几乎没有不能用血清学试验确诊的。

（2）用于群体检疫、疫苗免疫效果监测。如牛布病；

（3）流行病学调查。

这些工作为提高诊断医疗水平，保障人畜健康具有无可估量的价值。

2、生物活性物质的超微定量

激素（动物、植物、昆虫）、酶、神经递质、维生素、抗生素、细胞因子、植物生长调节剂、细菌和真菌毒素、农药残留。

设计到动物、植物、昆虫、生物防治、食品卫生等。

3、物种及微生物鉴定

对于细菌、病毒、立克次体等，均可应用血清学试验快速鉴定，较之生物学鉴定方法要简易、快速得无法比拟，它不仅可以确定到种，还能区别同一种内的不同血清型和亚型，为疫苗研制提供重要依据。

单克隆抗体技术，可以将强弱毒区别。

4、抗原的细胞水平定位

荧光抗体染色，免疫酶组化染色。

5、有机物提取和纯化

免疫亲和层析