单抗特性的鉴定- 抗免疫球蛋白的类别和亚类鉴定
单克隆性的确定 包括杂交瘤细胞的染色体分析、单抗免疫球蛋白重链和轻链类型的鉴定和单抗纯度鉴定等。
抗体的类和亚类对决定提纯的方法有很大的帮助。除采用特殊的免疫方法和检测方法，最经常得到的单抗是IgM和IgG，分泌IgE的杂交瘤细胞很少见，而分泌IgA的杂交瘤通常只有在用于融合的淋巴细胞来自肠道相关淋巴组织才能得到。如在抗体检测中使用葡萄球菌A蛋白试剂，则不可能得到IgG以外的其他类的抗体。鉴定单抗Ig类和亚类的方法主要有两种，一种是免疫扩散，另一种是ELISA。
（A） 免疫扩散法
这种方法简便、准确，最常用。被检的McAb样品通常为杂交瘤细胞培养上清液，由于其中单抗的浓度较低，应先将其浓缩10-20倍左右再检测。小鼠腹水中的单抗浓度虽很高，但也含有小鼠本身的各类Ig，它们也会与相应抗血清发生反应，使鉴定结果出现混乱，即使将腹水稀释10-20倍后再检测也不能完全避免上述情况的发生，因此一般不用腹水型单抗作为被检样品。
材料：
a. 小鼠IgG及其亚类IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM、IgA的抗血清。
b. 0.06mol/L巴比妥钠-盐酸缓冲液（PH8.6）。
c. 1%琼脂糖凝胶：1g琼脂糖加入100ml 0.06ml/L PH8.6巴比妥钠-盐酸缓冲液中，隔水煮沸溶解，加0.02% NaN3防腐，4℃保存备用。
d. 洁净载玻片，打孔器（直径3mm），湿盒，酒精灯。
方法：
a. 杂交瘤细胞培养上清液的浓缩：取该上清液10ml装入透析袋中，用线扎紧，放在小烧杯中，透析袋周围堆置PEG6000或蔗糖或PVP（聚乙烯吡咯烷酮 polyvinylpyrrolidone），放于4℃数小时，待透析袋内液体量浓缩至约0.5-1ml时，吸出，可于-20℃保存备用；也可采用吹风蒸发浓缩。
b. 加热溶化1%琼脂糖凝胶，铺制琼脂糖板，每片约3ml。
c. 待琼脂凝固后，用打孔器在琼脂板上打出梅花形的小孔（中央1孔，周围6孔），然后封底。
d. 向中央孔加入抗小鼠IgG类或亚类抗血清，周围孔加入待检样品；加样后将琼脂板放入湿盒，置37℃水浴箱中12-24小时或4℃过夜，观察结果。
（B） ELISA法
该法不需要将样品浓缩，而且比免疫扩散法更快地得到结果。
材料：
a. ELISA所需用溶液同杂交瘤细胞的筛选一节。
b. 酶标板。
c. 山羊抗鼠Ig；兔抗小鼠Ig类及亚类特异性血清；HRP结合的山羊抗兔Ig等。
d. 待检杂交瘤细胞培养上清；阴性、阳性对照样品。
方法一：
a. 每孔加入适量的100ul山羊抗小鼠Ig，室温2小时；洗涤液洗2次。
b. 每孔加200ul封闭液，室温作用1小时。
c. 洗涤液洗2次；加100ul杂交瘤细胞培养上清，4℃过夜；设阴性、阳性对照孔。
d. 洗涤4次，每孔加100ul兔抗小鼠Ig类及亚类特异性抗血清，室温2小时。
e. 洗涤4次，加100ul HRP标记的山羊抗兔Ig；室温作用2小时。
f. 洗涤后，加底物显色，判读结果。
g. 若有HRP标记的抗小鼠Ig类及亚类试剂，则可省去e。
方法二：
a. 以适宜浓度的抗原包被酶标板，100ul/孔，4℃过夜。
b. 洗涤后，加入待检的单抗样品，100ul/孔，37℃ 1小时；设阴性、阳性对照孔。
c. 洗涤后，加入HRP标记的抗小鼠类及亚类Ig的抗体试剂，100ul/孔，37℃避光显色15分钟；用2mol/L H2SO4终止反应后，阅读各孔的OD490值。
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